动物造模,基因敲除小鼠模型 中国实验动物信息网 2021-02-22 572

　　目的：使用聚类的，规则间隔的短间隔回文重复（CRISPR）/ CRISPR相关蛋白9（Cas9）]基因编辑技术来构建抑制素基因敲除小鼠模型，以进行初步的表型分析。通过根据方法激活素α亚基的*个外显子的碱基序列设计单个指导RNA sgRNA识别序列，构建了sgRNA表达质粒。使用T7NA聚合酶体外转录sgRNA和Cas9 mRNA后，将sgRNA/Cas9 mRNA显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，通过PCR和基因测序检测新生小鼠抑制素α亚基基因的突变。选择用于F2基因敲除的纯合的雄性和雌性小鼠，收集雄性睾丸和雌性卵巢进行观察，并进行石蜡切片和HE染色。

　　结果：总共获得了12只FO代激活素基因敲除小鼠。将8只雄性小鼠和C57BL/6J雌性小鼠回交以获得F1代小鼠，然后交配以获得F2代小鼠。 F2代小鼠中每种基因型的比例均符合孟德尔定律，而敲除小鼠并非具有胚胎致死性。 F2纯合子小鼠出现癌性睾丸和卵巢，无法生育。

　　结论：我们已经成功构建了激活素基因敲除小鼠模型。 F2纯合小鼠的癌性表型表明，激活素在小鼠生殖系统中起重要作用。