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【动物造模】-抑制素基因敲除小鼠模型的构建及表型初步分析

  目的:使用聚类的,规则间隔的短间隔回文重复(CRISPR)/ CRISPR相关蛋白9(Cas9)]基因编辑技术来构建抑制素基因敲除小鼠模型,以进行初步的表型分析。通过根据方法激活素α亚基的*个外显子的碱基序列设计单个指导RNA sgRNA识别序列,构建了sgRNA表达质粒。使用T7NA聚合酶体外转录sgRNA和Cas9 mRNA后,将sgRNA/Cas9 mRNA显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中,通过PCR和基因测序检测新生小鼠抑制素α亚基基因的突变。选择用于F2基因敲除的纯合的雄性和雌性小鼠,收集雄性睾丸和雌性卵巢进行观察,并进行石蜡切片和HE染色。

  结果:总共获得了12只FO代激活素基因敲除小鼠。将8只雄性小鼠和C57BL/6J雌性小鼠回交以获得F1代小鼠,然后交配以获得F2代小鼠。 F2代小鼠中每种基因型的比例均符合孟德尔定律,而敲除小鼠并非具有胚胎致死性。 F2纯合子小鼠出现癌性睾丸和卵巢,无法生育。

  结论:我们已经成功构建了激活素基因敲除小鼠模型。 F2纯合小鼠的癌性表型表明,激活素在小鼠生殖系统中起重要作用。

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