动物造模,荧光定量PCR 中国实验动物信息网 2023-03-13 1643

　　目的：建立一种实时荧光定量PCR检测小鼠肝炎病毒（MHV）的方法，并将其首先用于检测实验性裸鼠和其他啮齿动物。

　　方法：选择MHVE基因的保守区，设计和合成特异性引物和探针，建立荧光定量PCR方法，并确定方法的特异性，灵敏度，线性，可重复性和方法，并验证稳定性。同时，采用既定方法，对79只干净的小鼠，35只SPF小鼠，63只裸63鼠，10只沙鼠，20只金仓鼠和4只松鼠进行了MHV测试。

　　结果：我们成功建立了MHV实时荧光定量PCR方法。该方法的线性范围是（1x101？1x109）复制/μL，并且与仙台（SV）病毒和reovir兼容。 3型（Reo3），小鼠肝炎病毒（PVM）和牛冠状病毒（BCV）是非交叉反应的，该方法的检测灵敏度为10拷贝/ L。重现性和稳定性测试表明，实验之间的变异系数小于5％。测试结果显示63只裸mole鼠，35只SPF小鼠，10只沙鼠，20只金仓鼠和4只地面松鼠均为阴性。 79只干净的小鼠的MHV阳性率为22.78％。与RT-PCR相比，该方法的信度为97.47％。

　　结论：建立的MHV荧光定量PCR方法具有特异性和灵敏性，可以检测各种啮齿动物携带的MHV。