纤维样滑膜细胞炎症模型 中国实验动物信息网 2021-01-05 487

　　目的 建立大鼠的正常膝关节滑膜细胞原代培养方法及脂多糖诱导成纤维样滑膜细胞炎症模型。

　　方法 选取80~120g SPF级幼年SD大鼠, 分离其滑膜组织,原代培养至第3代,用组织化学染色法和EdU法检测FLS蛋白标志物vimentin和增殖功能。 同时,用滑膜组织作对照,检测第3代至第8代原代培养FLS的特征蛋白表达,筛选具有生理功能的高纯度且可用于后续实验的FLS细胞。 LPS诱导FLS炎症后,检测LPS制激FLS不同时间点的 IL-1β和TNF-α的mRNA和蛋白表达,根据实验结果确定LPS成功诱导FLS炎症模型的时间点。 *后,检测FLS被LPS诱导前后的细胞因子、增殖功能和特征蛋白的表达,为分析FLS炎症模型提供实验数据。

　　结果 采用0.2% I型胶原酶消化法,成功培养了FLS原代细胞。 经检测蛋白标志物vimentin, 第3代FLS纯度达98%以上。 通过FLS特征蛋白检测,筛选出具有生理功能且可用作后续实验的FLS为第3代至第7代原代细胞。 通过对LPS诱导后的FLS的细胞因子和特征蛋白分析,确定1μg/mL LPS诱导FLS细胞3h,能复制出FLS炎症模型。

　　结论 LPS诱导的FLS炎症模型可作为体外研究炎性关节病的细胞模型。