巨噬细胞 中国实验动物信息网 2020-12-18 520

　　目的  分析结核菌(Mtb)感染的程序性死亡配体 1(Pdl1)特异性敲除的巨噬细胞(MΦ)转录谱变化,筛选 MΦ 内 PD-L1 作用相关的候选基因。

　　方法  构建敲除小鼠(Pdl1Flox / - ),通过 Cre-loxp 技术培育出 MΦ 上 Pdl1 特异性敲除的纯合和杂合小鼠(Pdl1Flox / Flox- Cre,Pdl1Flox / - - Cre),用 PCR 和流式细胞术验证。 分离上述小鼠腹腔 MΦ,利用转录组测序技术检测 Mtb 感染 MΦ 24 h 的表达谱,以同窝阴性小鼠(Pdl1Flox / Flox)为对照,进行生物信息学分析。

　　结果  PCR 和流式细胞术证实小鼠敲除成功。 纯合、杂合及同窝阴性小鼠感染前后相比,差异表达基因*显著富集项为参与免疫反应和免疫过程的 GO(P < 0. 01;P < 0. 01),筛出 17 个 PD-L1 相关的候选基因。 通过 KEGG 富集分析,*显著富集的通路有 Toll 样受体、NF-κB 信号通路等(P < 0. 01;P < 0. 01),筛出 6 个候选基因。

　　结论  通过转录谱分析,确定与免疫反应及免疫过程有关的 Ccl2、Qa5、Il12a 等 17 个基因,免疫及炎症相关代谢通路的 Ptgs2、Cd40、Card11 等 6 个基因为 Mtb 感染的 MΦ 内 PD-L1 相关的候选基因,除 Il6 外均为本研究新筛选的候选基因。