动物模型,帕金森 中国实验动物信息网 2020-07-29 1159

　　为了模拟人的PD，理想的动物模型应具有以下特征：（1）出生时多巴胺能神经元的数量和形态正常，超过50％随着减少，年轻人很容易通过神经化学反应并逐渐减少。和神经生理学方法；（2）该模型应能够轻松检测其运动功能的损害，包括PD的关键症状，例如运动延迟，肌肉僵硬和静息震颤；（3）该模型应能够显示路易体；（4）如果该模型是遗传性的，则应基于单个突变，因此该突变模型具有很强的传播能力（5）模型应具有相对较短的疾病周期（例如数月），以使药物筛查经济，直接。

　　国际上有两种一般的国内应用：①将6-羟基多巴胺（6-OHDA）注入黑质或前脑内侧②模型动物（猴子，小鼠，猪等） 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTR）通过口服管和立体定向注射。前者是一种较经典的模型制备方法，在中国发展较早，但其存在（1）神经元损伤出现较早，并与临床PD患者黑质中多巴胺能神经元的进行性死亡有关。 （2）很难理解短距离的损坏程度，因此使用这种方法获取部分损坏的模型的成功率非常低，而中国的MPTP则远没有以前的方法成功。使用管灌和立体定向注射方法。 MPTR用于制备帕金森氏病的动物模型，已在国外用于建立猴子和小鼠的理想PD模型。该制剂通常使用可靠且可重复的皮下，静脉内，腹膜内注射和肌肉内给药。然而，这是非常危险的，并且对测试人员和测试条件有严格的要求。 1.模型小鼠的制备

　　1968年，Ungenstdet首次报道了6-多巴胺（6-OHDA）用于在大鼠中引起帕金森氏病的动物模型。这种动物旋转模型的某些特征类似于人类小偷金盏花。*近，人们根据注射部位和6-OHDA的剂量，建立了模仿帕金森氏病各个阶段的动物模型。

　　注射6-OHDA以制备帕金森氏病大鼠：

　　1）在实验中，选择了36只体重为250-300 g的健康Wistar大鼠以制备帕金森氏病大鼠模型

　　2）腹腔注射麻醉的大鼠巴比妥（48mg/kg）

　　3）解剖操作麻醉的大鼠固定在江湾I-C立体定位仪上，头部居中。切开，剥离骨膜，停止出血。参考George's Atlas，并使用牙钻在颅骨顶部钻一个孔。定位坐标是平行于耳棒的切牙，在前烟囱后3mm，侧向开口3.0mm，在颅骨表面上9.0mm，并在右NS区域插入了一个自制的同心套管。 （套筒的外径为0.7毫米，内管的外径为0.4毫米，内管距外管的前端1.5毫米。用粘合剂502和自固化牙托粉固定。

　　4）微注射器以1μg/ min的速率吸入4μL的6-OHDA溶液（含9.0μg6）-OHDA和8.8μg的抗坏血酸，然后静置4分钟以排干皮肤并缝制皮肤。

　　5）帕金森氏症的21个主要日子是指弗朗索瓦的实验方法，包括慢速运动测试，抓地力测试，尾部僵硬测试和震颤测试以记录紧张症状的变化记录下来。记录EMG更改，以识别大鼠模型是否成功。判断标准如下。 （1）慢速运动持续35分钟（2）握力实验持续55分钟，尾巴刚度实验持续30分钟（3）震颤频率为48次/分钟以上，EMG组放电位置频率为4-8次/秒..使用

　　2,6-PDDA

　　准备侧向PD小鼠模型

      1）雄性Sprague-Dawley大鼠，体重230-250 g

　　2）用戊巴比妥钠（30 mg/kg）麻醉实验动物，固定的立体定位设备（江湾IC型）。

　　3）参照大鼠大脑的立体定位图，两个目标点a：前reg尾侧5.0 mm，中线右侧1.9 mm，硬脑膜腹侧7.4 mm，b点：前reg尾侧5.3毫米，中线右侧2.5毫米，硬膜腹侧6.5毫米）。将12μg的6-OHDA（Sigma）立体定向注射到右侧黑质a和b的两个靶标中（注射量6μg，浓度2μg/μl，正常使用0.1％抗坏血酸）溶于盐水）。进样速度为0.3μl/ min。注射*后一根针15分钟。

　　4）行为检测模型建立三周后，使用阿扑吗啡（APO）将大鼠以0.25 mg/kg的速度向左旋转（完整侧）。记录30分钟内的转数，并选择210转。 30分钟（7转/分钟）以上的动物具有成功的PD模型

　　使用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶

　　准备PD动物模型3.灵长类PD模型恒河猴以腹膜内戊巴比妥（40mg/kg）麻醉，切开颈部皮肤，并用钝器解剖暴露一条颈总动脉。将动物注射到颈总动脉中。即，将新鲜制备的MPTP（Sigma）以1.0至1.5mg/kg体重溶于2mL生理盐水中，并沿血流方向缓慢注入血管中。如果动物在*次手术后没有明显的PD症状，则每5天注射2至4针，直到出现PD症状。 MPTP建立的灵长类动物双侧和半侧PD模型在症状，物理证据，病理学，生化和对药物治疗的反应方面与人类PD非常相似，并且*具代表性。被认为是典型的PD动物模型。

　　4、MPTP用于创建帕金森氏病的小鼠模型。小鼠对

　　MPTP的敏感性随种系和年龄而变化。通常，选择体重为25至30 g的10至12周大的成年C57BL褐家鼠，并以30至40 mg/kg的重量腹膜内注射MPTP 7天。第6至7次注射后，出现暂时性（2至3小时）躯干休克，垂直发，尾巴过度伸展，运动减少和攀爬测试受损。

　　5.使用MPTP创建金森氏病的小国模型时应注意的事项

　　C57BL小鼠对MPTP*敏感，但CF-W，FVB/N和Balb/C小鼠是MPTP与C57BL小鼠相比，CF-1和CD-1对MPTP的敏感性*差。当前，*常用的小鼠是C57BL/6小鼠。b）小鼠年龄对MPTP敏感性的影响老年小鼠对MFTP的敏感性高于幼年小鼠。这种敏感性上的差异不仅可以在顺式疗法中得到体现。在年长的小鼠中，黑质中的多巴胺能神经元的数量明显减少，而蓝斑轨迹区域的肾上腺素能神经元的数量减少。在治疗后的老小鼠中也观察到更典型的帕金森氏病行为。学习变化

　　6.帕金森氏病小鼠模型行为变化的定量观察

　　）1）爬杆试验

　　2）悬架实验

　　3）游泳实验

　　上述定量观察方法是帕金森氏对金黄色葡萄球菌患病小鼠模型的行为研究提供了几种更准确和客观的方法，同时提高了实验的总体客观性。

　　7.建立模型的其他方法

　　1）利血平模型是一种多巴胺（DA）儿茶酚胺，主要通过抑制去甲肾上腺素能神经元末端的再摄取功能而储存在囊泡中。变送器耗尽。向雄性Wistar大鼠（体重280-300 g）的腹腔内注射固定剂量的利血平可导致钝性僵硬，这可能导致运动症状，例如震颤，屈曲和缺乏运动。神经化学分析表明，大鼠纹状体中DA和其他单胺递质的含量明显降低。因此。这种类型的模型在某种程度上模拟了PD的临床表现和神经化学变化。但是它有明显的缺点。首先，由药物注射引起的运动障碍在不同时期和个体之间差异很大。其次，血液的释放会同时释放多个递质，并且无法引起与PD相同的病理变化。因此，该模型的应用仅限于研究药物对肌肉僵硬的影响的实验，很少使用其他运动症状的研究。

　　2）Fe3 +模型1991年，一只雄性SD大鼠（250-300 g）Ben-Shachar将Fe3 +注入黑质中3周。 ，短期僵硬症状和自发的关节测试旋转运动。苯丙胺（AMPH）可以增强这种同时旋转运动。神经化学研究表明，同侧纹状体DA含量平均降低了95％，其代谢物3,4-二羟基苯基乙酸（DOPAC）和高香草酸（HVA）也显着降低。我已经知道了组织病理学证实，TH免疫染色阳性细胞可显着降低酪氨酸，而胶质细胞则活跃地增殖。

　　3）机械损伤模型研究表明，对内侧前肋道有机械损伤（MF可能导致黑质DA神经元进行性死亡。已建立的建模技术包括MFB脊）为了建立MFB截肢损伤模型，必须精确固定大鼠立体定位设备，并使用特殊的Scouten来切开MFC。使用钢丝刀，Brechne使用这种方法切割雄性CFHB，MFB小鼠（150-180g）在第1、2、4、6、10和16周后存活。我们发现大约28％的黑质（SN）神经元在一周内死亡，大约70％的细胞在10周后死亡。平均S.为29％，逆行追踪，MFB切取成功率为92％-99％，可见该方法具有以下优点：①成功率高②黑质DA神经元表现出进行性死亡并能够模拟PD的病理变化的整个过程，这在神经元再生和PD预防的研究中具有一定的重要性。马上就要损坏了，程度不稳定。