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miR-221在H2O2诱导的大鼠心肌细胞损伤中的作用及机制研究

  目的: 探讨miR-221在过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠心肌细胞(H9c2)损伤中的作用及机制研究。

  方法: MTT法检测不同浓度H2O2对H9c2细胞的损伤作用,RT-PCR法检测miR-221表达量。通过Lipofectamine 2000将miR-221 inhibitor及阴性对照转入H9c2心肌细胞,并将实验分为4组,正常对照组,模型对照组(H2O2组),阴性对照组(H2O2+阴性对照组),抑制组(H2O2+miR-221 inhibitor组)。MTT法检测细胞活力,吖啶橙染色检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bax,Bcl-2,10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因蛋白(PTEN)及p-蛋白激酶(AKT)表达。

  结果: 0、25、50、100、200、400μmol/L H2O2对H9c2细胞活力的抑制作用逐渐加强,其中200μmol/L H2O2对细胞活力抑制程度适中,因此作为后续诱导剂量。与正常对照组比较,模型对照组及阴性对照组中miR-221表达量显著上调(P< 0.01),H9c2细胞活力降低(P< 0.01),细胞凋亡率显著提高(P< 0.01),Bax及PTEN表达量上调(P< 0.01),Bcl-2及p-AKT表达量下调(P< 0.01)。与模型对照组及阴性对照组比较,抑制组中miR-221表达量显著下调(P< 0.01),H9c2细胞活力提高(P< 0.01),细胞凋亡率显著降低(P< 0.01),Bax及PTEN表达量下调(P< 0.01),Bcl-2及p-AKT表达量上调(P< 0.01)。

  结论: miR-221低表达能显著抑制H2O2诱导的H9c2心肌细胞氧化应激损伤,与调控PTEN/AKT信号通路有关。

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