实验动物 中国实验动物信息网 2020-11-05 659

      2004年经四川省林业厅批准，四川省科技厅立项—藏酋猴实验动物标准化研究，四川省医学科学院·四川省人民医院实验动物研究所成为了全国唯一一家从事藏酋猴研究研究的单位，2004年以来该所共投入近600万元对藏酋猴开展了各方面的研究具体如下。

　　1.驯养环境和设施的研究

　　建立了藏酋猴驯养场，具备足够的室内居住和室外活动场地，坚固、能防止逃逸，兼顾藏酋猴野外的生活习性，设置相应有玩、吃、睡的地方。

　　2．人工驯化饲养和繁殖的研究

　　通过林业部门野生动物救助中心从马边县引进野生藏酋猴(指名亚Macaca thibetana thibetana Milne—Edwards)173只，对引进的野生藏酋猴进行了体内外寄生虫检测和驱虫，人畜共患的结核病菌素检测，编制了进场野生猴的检疫（结核和体内外寄生虫）规程和技术规范；野生猴人工驯养和管理规程；

　　初期选择经检疫后的一些体格健壮，生理和形态特征好的野生藏酋猴，建立繁殖群。

　　目前妊娠分娩的仔藏酋猴近120只，存活近100只，摸索出了藏酋猴婴幼藏酋猴人工哺乳方法。

　　经过多年的研究观察，对于藏酋猴的妊娠分娩规律在认识上有了更新。据资料介绍野生藏酋猴非季节性交配，季节性繁殖，产仔时间为1～8月。而我们在养殖过程中发现，野生藏酋猴在我们驯养繁殖场2006年9月、12月也产仔，这说明野生环境下的藏酋猴随着饲养环境的改善，在人工驯养条件下可转化为非季节性交配，非季节性繁殖。

　　3．饲料配方的设计和食料制作工艺、饲喂方法的研究。

　　根据国家灵长类实验动物饲料营养标准，结合藏酋猴特点我们开展了饲料配方的设计和食料制作工艺、饲喂方法的研究。

　　4．疾病的预防、治疗技术和方法的研究。

　　建立日常的卫生消毒、新进猴的疾病检疫，防疫管理措施和制度，主要常见疾病的预防和治疗方法的建立，能有效的控制藏酋猴主要常见传染病流行、多发病的预防和治疗。腹泻是藏酋猴常见病，我们有了一些经验体会，其患病率从2005年度患病率的90%到2012年的10%，已有明显下降，疾病治愈率有明显提高，

　　5．藏酋猴的个体识别、个体档案资料的建立与管理

　　能方便、准确、有效的进行个体识别，并据此建立该个体档案资料和家族系谱遗传资料。有了个体识别我们能把每只猴从出生到成年后的生长繁殖情况、遗传背景、疾病的预防和治疗情况记录成档，为以后开展的研究工作奠定了基础。

　　6．按照国家灵长类实验动物的微生物和寄生虫控制标准进行微生物控制

　　建立微生物检测方法。内容包括：猴体外寄生虫、肠道蠕虫、结核、肠道病原菌（沙门、志贺氏菌）、皮肤病原真菌、猴B病毒（猴疱疹病毒I型）、猴弓形虫等检测。

　　7．实验室基础研究

　　7.1 藏酋猴遗传学DNA（RNA）研究

　　为分析和建立繁殖群个体的遗传背景，建立了猴血提取DNA（RNA）的方法和技术。

　　通过梯度密度离心方法由藏酋猴外周血分离出淋巴细胞，在1640 + 10%胎牛血清培养液中培养，并用PHA激活分裂。由该细胞提取总DNA和RNA，利用人和恒河猴gamma干扰素和白介素-6基因的引物，通过TR-PCR 和PCR方法扩增出藏酋猴两个基因的cDNA，纯化的cDNA连接到PMD16-T克隆载体上，转染大肠杆菌细胞，扩增纯化得到大量以上两个基因的DNA。然后用ABI3730序列分析仪进行核苷酸序列分析。得到的序列结果与其他灵长类动物（包括恒河猴、南方豚尾猴、食蟹猴、几内亚狒狒、白领白眉猴等17种灵长类动物）干扰素和白介素-6基因进行了比较遗传学和系统发生学的研究。首次测定了藏酋猴干扰素和白介素-6基因的核苷酸序列，并从基因水平确定了藏酋猴属旧世界猴的进化地位，与恒河猴两个基因序列高度一致，一致性分别达到99.4-99.8%，与人的感染医学方面的基础十分接近，肯定了其在生物医学研究中的应用价值。对藏酋猴作为新的实验动物的遗传背景深度了解和分析，以及作为实验动物种群的遗传学管理提供了大量指导性的信息和理论基础。

　　完成了藏酋猴线粒体DNA全序列测定，全序列长16540bp，包含13个蛋白质编码基因，22个转运RNA基因，2个核糖体RNA基因和1个控制区。结合其他物种基因数据库的资料并对其遗传组织结构进行了分析。证明其在进化地位上的与恒河猴一样与人血缘关系接近，遗传基础方面可以替代恒河猴进行的生物医学研究工作；新发现两个假基因X23（2003bp）和X9（2180bp）；并且该种群遗传多样性较高（h=0.9033，∏=0.0155）,近交和遗传漂变较小，为种群的遗传管理和维持遗传多样性提供了理论基础。对藏酋猴作为新的实验动物的遗传背景深度了解和分析，以及作为实验动物种群的遗传学管理提供了大量指导性的信息和理论基础。

　　7.2生物节律的研究

　　方法：采用小型可植入式体温监测设配和小型项圈式活动监测设备，分别于自然条件和全黑条件连续监测藏酋猴体温和自发活动节律变化，以halberg余弦法分析节律特征。在不同时间点（实验的每周的*天，每天六个时间点，每个时间点间隔四小时）采集后静脉血，分离血清以放射免疫法检测血清皮质激素水平变化。将藏酋猴的全黑生活环境分别置于有和无其它猴群生活的环境中，分析各自环境中藏酋猴自发活动节律的变化。获取藏酋猴血液样本制备cDNA，通过多种动物节律基因cDNA序列同源性分析以人为模板分别设计主要节律基因PCR引物，以PCR产物测序，以确定藏酋猴中是否存在相应的节律基因片段。近日节律分析方法采用以halberg余弦法为主的综合分析方法。

　　结论：藏酋猴具有明显的近日节律表现，其自发活动节律由自然光照进入全黑环境后的适应过程快于人和小鼠，其自由节律周期略短于人类，可能与其长期的野外生活相关；藏酋猴存在与人类自发内源性异步现象相似的节律异步现象；藏酋猴体内可能存在clock基因（已经发现同源基因序列，尚未证实其功能）；社会因素可能是对藏酋猴起作用的授时因子；在藏酋猴的节律分析中均未发现近七日节律成分。

　　7.3生物学特征

　　随体重和年龄增大，藏酋猴脂代谢速度减缓，易诱发人类相似高脂血症。在饲养与实验中观察到，与恒河猴和食蟹猴比较，如行为、心理等，脸部，手（皮纹或称指纹）、尾（极短），皮肤特征，自发脱毛率较高，雄性生殖器外露，性格上较为安静，温顺，易驯化，亲近人类，中老年猴易肥胖，活动迟缓等等，具有广泛应用医药学、生物学研究等的生物学特性，潜在的科学及应用价值极高。

　　7.4建议了正常血象、生化参考值的检测

　　我所现有各年龄短的藏酋猴近200只（20岁∽1岁）具有大量潜在开发价值主要有：

　　（1）       藏酋猴肠道菌特有的动物模型。

　　（2）       营养代谢特异性方面的动物模型。

　　（3）       肥胖动物模型以及因肥胖引起的其它动物模型的研究。

　　（4）       时间生物学模型。

　　（5）       生殖生理方面的动物模型。

　　（6）       老年病方面。

　　针对藏酋猴，我所能开展的项目科研项目主要有：

　　（1）       高血脂、高血糖、高血圧、致病菌大肠杆菌、志贺、菌沙门菌动物模型。

　　（2）       生殖生理方面的研究

　　（3）       行为学和精神病及神经生物学研究

　　（4）       猴的驯化。

　　（5）       传染病方面的研究。

　　（6）       药物代谢方面的研究。

　　（7）       药效试验研究，急性毒性试验，长期毒性试验。