动物实验,体外受精技术 中国实验动物信息网 2020-10-14 730

　　（1）卵细胞的收集按照

　　注射HCG后13-14小时，从法拉第管中收集卵细胞。该方法与第二部分“小鼠胚胎移植”中所述的方法相同。用0.1％透明质酸酶去除收集的卵基质细胞-卵形复合物以去除卵丘细胞，并将细胞置于TYH液滴中。

　　（2）精子的收集和体积

　　按照本章*节所述的方法从表皮中收集小鼠精子，或使用伪阴道和电刺激方法收集精子。我会。将精液离心，用TYH溶液洗涤2-3次，置于TYH液滴中，并在37℃，5％CO 2下温育，以使精子获得生育力。将可育的精液转移到含有卵母细胞的TYH液滴中，*终溶液的精子浓度达到4×106/ml。

　　（3）体外受精体外受精是通过将含有卵细胞和受精精子的TYH小滴在5％CO2下于37°C孵育6至8小时来完成的。从培养箱中取出培养皿，并用TYH溶液洗涤处理过的卵基质细胞。此时，在受精卵细胞中观察到第二极和两个原核。

　　（4）受精卵培养将受精卵在37℃，5％CO 2的TγYH液滴中培养24至28小时。显微镜显示卵裂球发育成2-4个细胞。将这些发达的卵裂球转移到BMOC-3、TYH或Ham's F-10中，洗涤2-3次，然后继续用相应的培养液培养，形成约20个卵裂球。

　　（5）胚胎移植按照本章第二节所述的方法，将体外受精的胚胎移植到假孕受体雌性小鼠的Faropius管中。