怎么制备帕金森病动物模型？

帕金森病动物模型

中国实验动物信息网

2020-10-14

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　　为了模拟人类帕金森病，理想的动物模型应具有以下特征：

　　（1）出生时多巴胺能神经元的数量和形态是正常的，在年轻时逐渐有选择地减少，减少了50％以上，并且容易通过神经化学反应。和神经生理学方法；

　　（2）模型应能够轻松检测运动功能受损，包括PD的主要症状，例如延迟，肌肉僵硬和静息震颤；

　　（3）模型Lewy的身体必须能够显示出形态；

　　（4）如果模型是遗传性的，则必须基于单个突变，以使突变模型具有很强的可传递性；

　　（5）该模型具有相对较短的疾病周期（例如数月），并且药物筛查应该是经济的并且可以快速进行。

　　一般国际国内使用两种方法。

　　（1）通过对模型动物（猴子，小鼠，猪等）进行治疗，将6-羟基多巴胺（6-OHDA）注入大鼠的实质性黑质或前内侧内侧。）进行1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTR）强制进料和立体定向注射。前者是一种较经典的建模方法，在中国发展较早，但它的存在神经元损伤出现较早，这是临床上患有大量黑质的PD患者的进行性多巴胺能神经元。

　　（2）由于难以掌握近距离的损坏程度，因此与以前的方法相比，使用此方法获得部分损坏的模型的成功率非常低。相比之下，中国采用了MPTP强制喂养和立体定向输注方法。 MPTR用于帕金森氏动物模型的创建，已被用于在外来猴子和小鼠中建立理想的PD模型。该制剂通常使用可靠且可重复的皮下，静脉内，腹膜内和肌内给药。但是，这非常危险，并且对测试人员和测试条件有严格的要求。

　　1、小鼠模型的制备

　　1968年，Ungenstdet首次报道了使用6-多巴胺（6-OHDA）引起大鼠帕金森氏病动物模型的过程。这种动物旋转模型的某些特征类似于小偷金森氏病。*近，人们基于注射部位和6-OHDA的剂量，创建了在各个阶段模拟帕金森氏病的动物模型。注射6-OHDA以制备帕金森氏病大鼠：1 在实验中，选择36只体重250-300g的健康雄性Wistar大鼠以制备帕金森氏病大鼠模型。

　　2）使用巴比妥（48 mg/kg）腹膜内注射用于大鼠麻醉

　　3）解剖外科手术将麻醉的大鼠固定在江湾I型C型立体定向固定装置上，在中间切开头部，并切开骨膜。将其剥离并止血。见乔治·阿特拉斯（George Atlas），并用牙钻在颅骨的上部打一个洞。放置坐标是一个平行于耳棒的凹口，前烟囱后3 mm，侧向开口3.0 mm，颅骨表面以下9.0 mm以及一个自制的同心套管插入右侧的NS区域（套管外径）。直径为0.7mm，内管外径为0.4mm，内管距外管前端1.5mm，用502粘合剂和自固化牙托粉固定

　　4）微注射器的容量为4μL。抽吸6-OHDA溶液（含9.0μg6）。 -OHDA和8.8μg抗坏血酸）以1μg/ min的速度注入，然后放置4分钟以缝合皮肤。

　　5）有关帕金森氏病的三种主要症状，请参见弗朗索瓦（Francois）实验方法（包括慢速运动测试，握力和尾部僵硬测试以记录进补症状的变化以及震颤测试）。记录了21天。然后，它记录EMG的变化，以识别大鼠模型是否成功。判断标准如下。（1）慢速运动实验需要35分钟，抓地力实验需要55分钟，尾部刚度实验需要30分钟。（3）颤动的频率为48次/分钟以上，EMG组的放电位置的频率为4?8次/秒。使用

　　2、6-OHDA

　　1)创建侧向PD小鼠模型1）重量230-250 g

　　2）用戊戊比妥钠（30 mg/kg）和固定的立体定向固定装置麻醉的实验动物关于港湾型IC）。

　　3）参考大鼠大脑的定位图，并取两个目标点：前B尾部5.0毫米，右中线1.9毫米，腹侧硬化剂7.4毫米，b点：B子尾部5.3 ，在中线右侧2.5毫米，在硬膜腹侧6.5毫米）。在右实质a和b的两个目标点立体定位注射12μg的6-OHDA（Sigma）（注射量6μg，浓度2μg/μl，生理正常，含0.1％抗坏血酸）。溶于盐水）。进样速度为0.3μl/ min。注射*后一根针15分钟。

　　4）建立行为检测模型三周后，使用0.25mg/kg的阿朴吗啡（APO）将大鼠向左旋转（完整侧）。我们记录了30分钟内的转数，并选择了210转。超过30分钟（每分钟7转/分钟）的动物是成功的PD模型

　　1-使用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶

　　3制备PD动物模型，灵长类动物PD模型Akagesaru 在戊巴比妥的腹腔中麻醉（40 mg/kg），钝性分离后切开颈部皮肤并暴露一条颈总动脉。将动物注射到颈总动脉中。即，将新制备的MPTP（Sigma）溶于2mL体重为1.0至1.5mg/kg的生理盐水中，并沿血流方向缓慢注入血管中。如果动物在*次手术后没有明显的PD症状，则每5天注射2-4次，直到出现PD症状。用MPTP建立的灵长类动物的双侧和半侧PD模型非常相似，并且在症状，物理证据，病理，生物化学和对药物治疗的反应方面*能代表人类PD。 PD动物模型被认为是。

　　4、MPTP用于创建帕金森氏病的小鼠模型。小鼠对MPTP的敏感性取决于其种系和年龄。通常，选择10-12周大的成年C57BL褐家鼠，体重25-30 g，并以30-40 mg/kg的重量腹膜内注射MPTP，共7天。第6至7次注射后，出现短暂的身体震颤（2-3小时），垂直发，尾巴过度伸展，运动减少和攀爬测试受损。

　　5、使用MPTP创建Kinsen病小国家模型

　　C57BL小鼠时，一些注意事项对MPTP*敏感，而CF-W小鼠，FVB/N小鼠和Balb/C小鼠对MPTP敏感。是。 CF-1和CD-1对MPTP的敏感性*低，比C57BL小鼠差一点。目前，*常用的小鼠是C57BL/6小鼠。b）小鼠年龄对MPTP敏感性的影响老年小鼠比年轻小鼠对MFTP的敏感性更高。这种敏感性差异不仅反映在治疗后的敏感性差异中。年龄较大的小鼠可能会表现出明显的实质性降级胺能神经元数量减少，位点区域的肾上腺能神经元数量减少以及更典型的帕金森氏病行为。在治疗后的老年小鼠中也可以观察到。学习变化

　　6、帕金森氏病小鼠模型中行为变化的定量观察

　　1）爬杆试验

　　2）悬挂实验

　　3）游泳实验

　　上述定量观察方法是帕金森氏方法。受影响的小鼠模型的行为研究提供了一些更准确和客观的方法，并且还改善了整个实验的客观性。

　　7、建立模型的其他方法

　　1）利血平模型主要是抑制去甲肾上腺素能神经元末端的再摄取功能，从而导致囊泡和其他儿茶酚胺递质中的多巴胺（DA）。消耗。向雄性Wistar大鼠（体重280-300 g）的腹腔注射一定量的Reserpin会减慢受伤肌肉的僵硬，并可能导致震颤，屈曲，缺乏运动和其他运动症状。 ..神经化学分析表明，大鼠纹状体中DA和其他单胺介质的含量明显降低。因此。这种类型的模型在某种程度上模拟了PD的临床表现和神经化学变化。但是，它有明显的缺点。首先，由药物注射引起的运动功能障碍在不同时间，不同个体之间差异很大。其次，血液复苏可导致同时释放多个变送器，无法引起类似于PD的病理变化。因此，该模型的应用仅限于研究药物对肌肉僵硬的影响的实验，很少使用对其他运动症状的研究。

　　2）Fe3 +模型1991年，一只雄性SD大鼠（250-300g）的Ben-Shachar单方面将Fe3 +注入到大量的黑格拉中3周。，短期僵硬症状和自愿的关节测试旋转行为。苯丙胺（AMPH）可以增强这种同时旋转操作。神经化学研究已将同侧纹状体的DA含量平均降低了95％，以及其代谢产物3,4-二羟基苯基乙酸（DOPAC）和高纯酸（HVA）的含量。我发现。组织病理学证实TH免疫染色阳性细胞显着减少酪氨酸并活跃地增殖神经胶质细胞。

　　3）对机械损伤模型的研究发现对内侧前肋束的机械损伤（MF可以导致已建立的大量Nigra DA神经元进行性死亡。建模方法包括MFB脊和半切除，前者被广泛使用，需要在大鼠脑立体定位设备上精确定位以建立MFB劈裂损伤模型，其次是用特殊的侦察铁丝刀刺穿MFB并切割MFB。Brechne用这种方法切割雄性CFHB。MFB小鼠（150-180 g）存活计算1、2、4、6、10和16周时DA神经元的数量发现，大约28％的实质性黑质（SN）神经元在1周内死亡。10周后，这些细胞大约70％的人死亡，平均存活的SN神经元数量为29％，逆行随访显示，MFB切除的成功率为92％至99％。（1）比成功率高的方法更经济（2）实体Nigra DA神经元表现出进行性死亡，并可以模拟PD病理变化的整个过程。对PD的再生和预防的研究具有重要意义，其缺点是切割后短期受损，程度不稳定。