动物实验,肝炎病毒,ELISA 中国实验动物信息网 2020-10-12 396

　　目的：建立一种小鼠肝炎病毒（小鼠肝炎病毒，MHV）血清抗体ELISA检测方法，用于对该地区的MHV进行常规监测，以便及时确定SPF小鼠的感染状况。

　　方法：选择三种类型的MHV菌株，MHV1、MHV-JHM和MHV-A59，通过L929细胞的增殖和培养获得纯化和浓缩的抗原，并选择合适类型的包被抗原。免疫BALB/C小鼠以获得高滴度的免疫阳性血清。优化ELISA反应系统，以建立标准化的ELISA试剂盒，并将其用于检测临床小鼠血清样品。

　　结果：我们将适合该区域的MHV包被的抗原类型筛选为MHV1、并建立了病毒扩增/浓度纯化方法。所制备的MHV抗血清在同一批次中达到多个高滴度水平，可用作标准化质量控制血清。包被内，批间和批间的包被抗原，待测血清和酶偶联物的*佳工作浓度为4.0μg/ mL（10-7.73/0.1 mLTCID50），1：40和1：4000稀释度。平均波动系数不同。 5.13％和5.57％，检测灵敏度1：4000稀释，小鼠仙台病毒（SV），小鼠肺炎病毒（PVM），III型Leovirus（Reo3），小鼠细小病毒（MVM），小鼠痘病毒（Ect）呈阳性血清没有交叉反应。稳定性测试的相对偏差小于10％。测试了165个血清样品，血清一致率为97.37％（37/38），阴性血清一致率为92.19％（118/127）。

　　结论：本研究建立的ELISA方法检测小鼠血清中MHV抗体的结果具有很高的特异性，敏感性和可重复性，可用于该地区MHV的日常致病性监测。您可以准确确定鼠标的感染状态。