艾滋病,基因编辑技术 中国实验动物信息网 2020-10-09 473

　　CRISPR/Cas9系统为编辑HIV-1病毒基因组提供了新的潜在工具。*近，神户大学医学部传染病中心和卫生科学研究院国际卫生学院的研究人员设计了RNA指南。 CRISPR/Cas9靶向HIV-1调节基因tat和rev。所有指导RNA（gRNA）均基于CRISPR的特定设计，并且靶序列在六种主要的HIV-1亚型中均保守。在共转染之前，将每个gRNA克隆到CRISPRv2慢病毒中，从而创建慢病毒载体并将其转染到细胞中。与用空载体转染或未转染的细胞相比，CRISPR/Cas9是293吗？它在T和HeLa细胞中稳定表达Tat和Rev，并通常抑制这两个基因在细胞中的表达。

　　tat功能测试表明，用tat-CRISPR进行转染可显着抑制HIV-1启动子驱动的荧光素酶的表达，而Rev功能测试表明，经rev-CRISPR进行转染后的gp120。结果表明表达被完全抑制。 Cas9剪接位点的靶基因具有不同程度的高频突变。值得注意的是，研究人员未在非靶位点检测到突变，并且Cas9表达不影响细胞活性。

　　研究人员进一步在受HIV-1感染的T细胞系中测试了CRISPR/Cas9系统，并且重新刺激的细胞因子显着抑制了p24表达，并同时使用了6个gRNA然后我发现它可以进一步增强。因此，使用CRISPR/Cas9系统靶向HIV-1调节基因可能是实现功能治愈的有效方法。