动物实验,CRISPR-Cas9,基因敲除 中国实验动物信息网 2020-09-28 1208

　　*近，美国哈佛大学的研究人员在国际学术期刊《发展细胞》上发表了*新研究成果，并使用基于CRISPR-Cas9技术开发的载体系统实现了斑马鱼组织特异性基因敲除。做到了主要研究工具是鱼类的科学家无疑是个好消息。斑马鱼由于易于繁殖，繁殖周期短，产卵量大，胚胎的体外受精，体外发育和透明的胚体而成为生命科学研究中的重要模式生物。该平台。斑马鱼可用于研究生命科学的基本问题，并阐明胚胎和组织器官发育的分子机制。您可以建立各种人类疾病和肿瘤模型，并建立用于药物筛选和治疗的研究平台。可以建立毒理学和水生繁殖。对环境和农业科学中的关键问题进行建模，研究和解决。作为一种基因编辑工具，

　　CRISPR/Cas9技术被广泛用于多种平台和系统，显着促进了体内和体外靶基因的敲除。在这项研究中，研究人员开发了一种基于CRISPR-Cas9技术的载体系统，以实现斑马鱼的组织特异性基因敲除。他们在斑马鱼中使用了CRISPR/Cas9技术，只需在单细胞胚胎阶段注射指导RNA（gRNA）和Cas9 mRNA，即可快速获得基因敲除斑马鱼。为了证明该技术的适用性，研究人员构建了一个载体，该载体带有gata1启动子，该启动子驱动Cas9表达，并特异性敲除参与红细胞血红素合成的urod基因。通过靶向Urod基因，研究人员在斑马鱼胚胎中观察到了红色荧光红细胞，并重复了在yquem突变斑马鱼中观察到的表型。镶嵌基因破坏发生在F0胚胎中，这种表型在F1斑马鱼中非常明显。

　　这种基于CRISPR的载体系统为在斑马鱼中实现组织特异性基因敲除提供了便利的方法。这大大扩大了斑马鱼功能丧失的研究范围，非常重要。