动物造模,巨细胞病毒,荧光定量PCR检测 中国实验动物信息网 2020-09-25 1068

　　目的：建立一种小鼠巨细胞病毒（MCMV）的荧光定量PCR方法，并对其进行提前应用。

　　方法：选择NCBI出版的MCMV Smith菌株的DNA聚合酶基因的保守序列，以设计引物探针，建立用于MCMV的荧光定量PCR方法，以及该方法的特异性，敏感性和可重复性。 ，并应用此方法来验证稳定性并检测假MCMV小鼠血液样本和2018年提交测试的409个小鼠血液样本。

　　通过建立的MCMV实时PCR方法的标准曲线斜率为-3.418，R2值为0.999，扩增效率为96.137％，*小可定量检测的MCMV含量为47拷贝/μL。使用大鼠巨细胞病毒，唾液巨细胞病毒，人类单纯疱疹病毒，假性犬病病毒和I型霜冻疱疹病毒作为模板，没有扩增曲线，并且具有良好的特异性。方法组内和方法组之间的变异系数分别为0.39％-0.68％和0.48％-1.01％，具有良好的重现性和稳定性。掺入小鼠的人类血液样本中MCMV病毒的*大稀释度为1：1000（100.75TCID50/0.1 mL），所有409个小鼠血液样本均为阴性。结论结论建立的小鼠巨细胞病毒荧光定量PCR方法灵敏度高，特异性强，稳定，可以有效检测小鼠的MCMV，并可以监测实验小鼠的MCMV并补充相关标准。