动物造模,CRISPR/Cas9,Bpi基因敲除 中国实验动物信息网 2020-09-25 613

　　目的：使用CRISPR/Cas9基因编辑技术有效构建Bpi基因敲除小鼠模型，并继续繁殖，鉴定和构建稳定的Bpi基因敲除小鼠品系。

　　方法：设计了C57BL/6小鼠Bpi基因第2至3外显子两端的敲除靶标，筛选了高活性gRNA（guideRNA）靶标，并在体外转录了它们以获得sgRNA（smallguideRNA）。将经显微结合Cas9 mRNA的C57BL/6小鼠注射到受精卵中，将胚胎转移至代孕母鼠，获得F0代小鼠，并对具有基因突变的阳性后代小鼠进行基因分型和DNA按顺序获得。

　　结果：筛选了高活性gRNA靶标并成功获得了体外转录本sgRNA。通过Cas9 mRNA，通过显微注射获得了64个受精卵，状况良好，并成功移植到了两只代孕母鼠中。仅22只F0代小鼠，经过PCR鉴定和DNA测序后，选择单链缺失708 bp碱基的阳性小鼠进行扩增，在F1和F2代中检测到突变，F2代是纯合的我们已经成功繁殖了一只配对的老鼠。

　　结论：成功构建了Bpi基因敲除小鼠模型，为进一步研究Bpi基因及其表达产物的生物学功能奠定了基础。