CRISPR-Cas9,基因编辑 中国实验动物信息网 2020-09-24 719

　　Cellesearch是《自然》自然出版集团的子公司，是中国科学院动物研究所王浩一和北京Genbu医院张永平的研究小组。我们已经发表了一篇名为“在线”的研究论文。刘小娟，张永平和成晨是该论文的共同主要作者，而研究员王浩义是该论文的作者。 CART（嵌合抗原受体T细胞）细胞疗法是一种非常有前途的肿瘤治疗方法，中文译为“嵌合抗原受体T细胞”。

　　嵌合体抗原受体（Chimera Antigeneceptor，CAR）是人为设计和合成的跨膜蛋白，包含三个部分：细胞外，细胞内膜和细胞内。 CAR的细胞外部分主要是单克隆抗体可变区（scFV），可识别特定抗原并负责识别特定抗原。跨膜区域确保CAR位于细胞膜上，而胞内区域则参与T细胞活化和T细胞介导的免疫反应的产生。临床数据表明，CART在治疗B细胞恶性肿瘤方面取得了出色的疗效。但是，当前所有使用的方法都是自体细胞移植（ACT），这既昂贵又费时。对于新生儿和老年患者，难以获得充足且优质的淋巴细胞用于CAR T细胞疗法。因此，CAR T细胞疗法的重要研究方向是利用健康献血者的T细胞制备大量CAR T细胞，供数百名患者临床使用。这项技术的建立将大大降低手推车治疗的成本，更好地保证制备好的细胞的质量，并让患者在需要时立即获得手推车细胞进行治疗。

　　异体供体T细胞用于制备通用CART以治疗多名患者，从而确保其安全性并防止过继细胞攻击患者自身细胞，同时免疫原性应降低以避免攻击。中国科学院动物科学研究所的王浩一研究小组使用CRISPR-Cas9技术从同种异体CAR T细胞中敲除αβT细胞受体（TCR），以避免发生植入宿主疾病（GVHD）。做到了。人白细胞抗原（HLA）的敲除降低了其自身的免疫原性。此外，PD-1是与肿瘤免疫逃逸相关的T细胞表面抑制剂，CART认为阻断PD-1信号通路已在许多类型的肿瘤中产生了良好的效果。我用细胞敲除PD。 -1基因阻断PD-1信号通路。制备异体CART细胞需要同时编辑多个基因，而RNA介导的DNA核酸酶系统CRISPR-Cas9是一个非常合适的技术平台。在这项研究中，使用CRISPR-Cas9系统敲除CAR T细胞中的两个基因（TRAC和B2M）或三个基因（TRAC，B2M和PD-1）。

　　结果表明，与常规CAR T细胞相比，这些基因编辑的CAR T细胞在体外和体内具有同等或更强的肿瘤细胞杀伤功能，从而使其成为临床应用的效应细胞。它显示了预期的结果。基因编辑技术与过继免疫结合在肿瘤和HIV/AIDS的治疗中具有广泛的潜在应用，并且该方法的建立为研究这些疾病奠定了坚实的技术基础。