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动物实验,遗传,动物造模
中国实验动物信息网
2020-07-24
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1.意义实验动物的基因检测主要是实验小鼠的基因检测。自从使用实验室小鼠作为研究工具以来，人们已经繁殖了许多实验室毒株，这些毒株现已分布在世界各地。封闭群体，近交，同类，重组近交和突变株的总数估计超过500种。由于这些品系在世界范围内的分布，因此会产生许多子系，并且同一品系的子系之间通常存在许多潜在的遗传差异。某些子系在保留其原始名称的同时可以携带或多或少地修饰基因组。因此，使用同一菌株进行的实验可能无法获得相同的结果，并且环境和实验条件通常会有所不同，但是每个人都知道这是遗传原因。我还没有。 ..近交小鼠遗传测试的重要性是根据小鼠标准化和命名委员会的标准检查近交菌株，并去除所有改变的等位基因。
异族人口基因测试的目的是维持遗传稳定性。也就是说，为了保留现有的遗传杂合性，种群中所有基因的基因频率比例始终保持恒定。
2.遗传变化的原因
（1）近交菌株遗传变化的原因
1.遗传污染由于这种交配引起的遗传污染不仅仅是一种，外源基因组是密切相关的。与近交菌株杂交的基因座的污染程度远远超过了遗传突变和遗传杂合性的发生，并且它们的发生是间歇性的而不是逐渐积累的变化。这种污染在某些菌株中更为常见，尤其是当几个白化菌株一起生长，育种人员未经培训且质量较差时，这种污染的发生是情况变得更糟。
2.残留杂合性使用严格的同胞交配，但近交菌株在特定位置保留残留杂合性。它基于20对染色体，总基因组长度为2500美分（cM），有60代同胞或亲交，全基因组纯合性的可能性大于99％，纯合性为仍然有些基因不是。另一个值得考虑的因素是，在受精，繁殖和存活方面，杂合基因型优于纯合个体，并且易于繁殖和传播。
3.基因突变现代科学已经证明基因突变主要是由于DNA序列的变化。这可以是特定的核苷酸取代，缺失或插入。从育种系统的角度来看，只有在代表血液的个体中发生突变，突变才真正起作用。
（2）近交菌株遗传变化的原因
与近交菌株相似，遗传污染和基因突变会导致近交的差异，而近交的等位基因选择分布是变化的主要原因。如果在远交组中所有基因频率的相对比例保持不变，那么*合适的核心育种组就需要1,000只动物。但是实际上，尤其是在现代，这是不可能做到的。为了控制微生物污染，人们经常使用剖腹产和生物技术重建新的人群。在重建过程中，基团突然变小并自交。系数必须增加，这导致杂合度降低。这也意味着某些基因是固定的。不同单位中不同位点的锚定通常会导致同一物种中等位基因的分布发生变化。
3.基因测试条件
（1）测试内容
1.生化标志物（生化标志物）。 2.免疫学测试包括皮肤移植，免疫标记基因测试（immunegene
markers）和其他方法。 3.形态学测试包括下颌骨测量（下颌骨测量），染色体标记测试（细胞遗传学方法）和DNA多态性检测（DNAmarkers）。
4. Coatgene测试。
实际上，不可能采用所有上述方法，但是它们不能基于单个方法。*好对菌株的遗传特性是否已根据生化标记，形态和免疫学进行了综合判断。
（2）测试动物
在进行基因测试时，有必要尽可能减少测试频率并减少采样以提高效率。
1.在测试基本组时，应测试所有后代繁殖小鼠的亲本动物。
2.在测试生产组时，如果女性人数少于100，则选择6个男性和一半，如果女性人数 超过100，则选择一半以上。选择≥6％的动物。测试要求每年至少进行一次基因质量测试。
四、基因检测方法（1）形态学检测方法
通常是指用于基因检测的形态基因标记，主要用于染发基因检测方法和下颌骨等。可以轻松检测外部形态特征的测量方法和其他方法。
1.外套颜色遗传测试方法C.C. Little在1909年在杰克逊实验室进行了*次外套颜色遗传测试。这种对外套颜色的观察一直是近交质量的重要指标。染发基因检测只能检测与染发相关的某些基因是否纯合，不能反映近交系的遗传特征，并检测其他位点的突变。很难做到。
（1）基本原理：小鼠毛色等位基因A，B，C和D分别位于2、4、7和9号染色体上。 A，B，C和D基因在相应的a，b，C和d等位基因上占优势，而C基因是其他色素基因的表位。如果存在CC隐性基因，则细胞中苯酚不足，并且该酶无法合成色素，因此，无论其他控制色素生成的基因如何，小鼠都看上去像白化病。小鼠皮毛颜色表型与基因型之间的关系如下：“ ABCD-”是野生色，“ A-bbC-D-”是肉桂色，“ aaB-CD-”是黑色，“ aabbC-D-”是布朗，--- cc--''是白化病。因此，根据遗传原理，具有隐性等位基因的小鼠与被测小鼠杂交，并且可以从F1后代的皮毛颜色推断被测小鼠的基因型。 ..
（2）方法
①已知可以使用纯DBA/2小鼠选择隐性等位基因小鼠，其基因型为“ aabbCCdd”。
②待测小鼠可能是其他颜色的白化病小鼠，但是近交品系对于近交品系的皮毛颜色基因或新培养的品系的基因型应是纯合的。它通常用作测试鼠标以达到理解的目的。当然，也可以使用杂种菌株。交叉线用作对照组以观察该毛色基因的分离。方法（3）在交配方法中，根据相同的条件，根据1：1或1选择大约70天大的具有已知隐性基因的雄性小鼠和雌性小鼠。 ：2自己交配，观察和记录交配和生产等时间和数据，并便于分析结果
（3）判断结果的标准
①如果F1孩子的颜色相同，则进行测试可以确定所选菌株的外壳颜色基因的纯合性
②同一窝的F1幼犬必须为7个或更多，并且每次测试中观察到的幼犬的数量必须为10个或更多。
③如果同一窝里有两只或更多的F1幼犬，则头发颜色表示被测小鼠具有遗传污染或突变。
（4）基因型的判断
①如果F1代具有相同的外壳颜色，则F1代仅具有一种外壳颜色，因此被判断为要测试的基因，并且只有一种基因型可用。确保该基因是纯合子，然后估计您正在测试的小鼠的基因型。例如，使用DBA/2测试BALB/c的外套颜色基因型。 DBA/2 x BALB/c F1代为肉桂色，基因型为AabbCcDd。与已知的DBA/2（银灰色）aabbCCdd基因型对进行比较，我们可以看到F1的A，b，c和D的四个等位基因来自BALB/c。由于是肉桂色，因此可以推断出测试的BALB/c染发基因是纯合子，基因型是AAbbccDD。
②如果F1代的发色不同，则将根据F1代的发色的差异确定并测试受测小鼠的基因型。由于小鼠的基因型不是纯净的，因此应放置基因，使其成为您正在测试的小鼠的基因型，而不是基因与已知基因型不同的纯净动物。
2.下颌形态是基于小鼠骨骼的。形态是高度遗传的和菌株特异性的。该标记物已成为监测实验动物遗传背景的传统方法之一。
此方法是将所有F1代大衣颜色基因型与已知基因型进行比较，并发现高水平的动物骨骼形态作为鉴定菌株的方法，包括骨骼形态，大小和您可以使用差异的遗传力。格林一直在1953年研究这个问题。在进行下颌骨分析方法时，将20 g±1 g的小鼠头骨煮沸3分钟或更长时间，在37°C下用胰酶消化24小时，然后用清水洗涤。下颌骨放置在L形矩形坐标板上，并测量各种骨标记。对于长度和高度，在表中输入每个测量点的值，并在计算后将其与标准置信区进行比较。在受信任区域中表示测试合格，而在受信任区域之外则表示测试不合格。通常，形态监测方法易于操作，成本低，不需要使用专用设备，实用性强但准确性较低。 （2）细胞学标记物检测方法细胞学标记物检测方法是动物染色体的变化，包括染色体的核型（染色体数目，结构，卫星的存在，着丝粒的位置等）和条带。类型（C区域，N区域，G区域等）改变。细胞学标志物比形态标志物的优势在于，它们可以找到某些重要基因的染色体或染色体区域。但是，细胞标记物需要大量的人力和长时间的培养，这非常困难。染色体染色是一种细胞遗传学技术，允许使用C和Q谱带区分作为染色体标记，以将近交小鼠与小鼠区分开。在大多数大鼠和小鼠的自交系中，所有中期染色体都具有C带物质，同源染色体的C带区域具有相同的大小。不同的自交系具有不同的C波段材料。一种检测子行变异和混淆源的有价值的方法。凌丽华等报道，对T739小鼠及其父母的C带染色体进行了研究，C带多态性表明T739和615小鼠为近交小鼠。 （3）生化标记物检测方法生化标记物基因检测是用于常规检测近交动物遗传纯度的常规方法。近交小鼠在近交大鼠中选择10条染色体和13个生化位点，大鼠选择9个生化位点作为生化标记物进行基因检测。醋酸纤维素膜电泳技术通常用于检测生化标记基因。找到要测试的标本（血清，肾脏匀浆等），进行电泳，然后显色。然后分析所得的电泳图谱以确定每个测试位点的基因型，并将这些基因型与每种菌株的标准基因谱进行比较，以列出相同和不同的基因座。去做。确定测试菌株的纯合度。它具有定义明确的基因座，简单，快速的方法以及相对经济的方法的优点，但以准确性较差为代价。
（4）皮肤移植方法
小鼠皮肤移植是纯动物遗传质量控制的基本方法之一、它简单，易操作且可靠。小鼠和人类在其相应的染色体上具有一系列基因座，这些基因座形成了主要的组织相容性复合体（MHC）或控制移植物存活的主要组织相容性系统（MHS）。小鼠MHC（位于17号染色体上的H-2复合物）决定了小鼠中主要的组织相容性抗原（相当于人HLA系统）。有56个已知的小鼠组织相容性基因座，例如
H-1、H-2、H-3 ... H-56、由于组织相容性基因占优势，因此它们可以在杂合子中单独表达。每个组织相容性位点的抗原抗原性不同。小鼠H-2位点是一种强抗原，强烈排斥同种异体移植物，移植的皮肤在约11天内被破坏。其余的H位点是弱抗原，也称为次要组织相容性抗原。这些部位只会延迟同种异体移植的排斥反应，其中一些可能持续长达100天。关于。
移植可分为不同类型：
1.自体移植是指同一个人不同部位之间的移植。例如，小鼠背部腰椎两侧的皮肤左右移植，但接受者可以识别出移植物的抗原是他或她自己的，因此不会发生免疫反应，并且可以长期存活。 2.同种异体移植是指同属个体之间的移植。根据遗传基因的差异，可分为：
（1）同基因移植（同基因）：纯动物的特征之一是基因型一致，这是皮肤移植成功的原因。受体的移植抗原与供体完全匹配，因为它是重要的基础，并且不会发生排斥。 （2）同种异体移植：所有小鼠都是相同的，但不是一种品系，但是它们的基因型是不同的。此类组织的移植必定会在受体中引起特定的免疫反应，并且移植仅在短时间内生长。毕竟，它被身体拒绝了。 （3）F1同源近交系的移植：当移植到F1小鼠体内时，F1亲本组织可能会生长。由于F1包含父母双方的等位基因的一半，因此没有免疫反应，但是由于父母的基因型不同，从F1后代到父母的组织移植被拒绝了。
在测试皮肤移植方法时，从每个菌株中至少选择四只同性成年动物进行同种异体皮肤移植。所有成功的移植都被认为是合格的，并且由于非手术原因导致的移植排斥被认为是不合格的。 （5）分子生物学的检测方法
自1980年代以来，分子生物学的技术和方法发展迅速，已成为生物学，医学和农业等许多领域中非常重要的新研究工具。它已成为。分子生物学标记技术可以直接测试动物基因组核酸的变化，为近交动物的遗传监测提供了直接而客观的方法。分子生物学标记技术主要包括以下几类：1. 微卫星标记微卫星是一个DNA序列，它与多个核苷酸（主要是2-4个）串联在一起。 ，其多态性也称为简单序列多态性，短串联重复序列或简单序列长度多态性。微卫星的两侧通常是保守的序列，其可用于设计用于微卫星等位基因PCR扩增的特异性引物。该序列广泛存在于人类和其他真核基因组中。丰度高，等位基因变异高，个体特异性高，易于检测，标记共有，稳定可靠，实验重复性好。经济。欧阳兆和等人研究了微卫星DNA多态性在近交小鼠基因监测中的应用，在小鼠不同染色体上选择了16个微卫星基因座，并采用PCR技术进行了研究。分析了使用的10个自交系。小鼠微卫星DNA多态性分析的结果是，14个微卫星DNA显示出稳定的扩增效果，在同一菌株的不同个体之间表现出单态性，并且在不同菌株之间表现出多态性。在14个位点进行微卫星多态性分析，可以对近交小鼠进行快速，经济的遗传监测。 2.随机扩增多态性DNA随机扩增DNA多态性（RAPD）是Wiliam和Welsh等人在1990年开发的一种检测DNA多态性的方法。使用随机合成的非特异性寡核苷酸引物（5-10 bp）扩增基因组DNA，以获得多态性DNA片段。APD客观地反映了每种生物的基因组之间的差异，并且大多数遵循孟德尔遗传规则。用于RAPD分析的引物在物种之间没有界限，也不需要事先知道要分析的基因的核苷酸序列。尽管怀疑RAPD标记的稳定性和特异性，但其操作简单，快速，经济和实用，其多态性检测率高。在小鼠中，RAPD标记用于分析群体之间的遗传距离，以进行基因连锁分析和基因作图。张文彦等。使用了100条引物来扩增BALB/c小鼠，C57BL小鼠和KM小鼠的样品。接近90％的引物获得了扩增条带，并选择了21个引物来扩增3种不同的小鼠组织样品。此外，有13种可以区分BALB/c和C57BL小鼠的引物，还有8种可以区分BALB/c和KM小鼠的引物。虽然仅凭外套颜色和外观很难区分BALB/c和KM小鼠，但只能通过观察扩增带来区分该方法。吴开平使用RAPD-PCR对小鼠进行了基因测试，并筛选了在不同小鼠品系之间显示出多态性的引物。APD技术在实验室动物研究中具有巨大的潜在应用，但缺点是RAPD指纹不可重现，需要提高在不同实验室中产生的差异RAPD基因标记的可比性。那是。 3. SNP标记SNP标记（单核苷酸多态性）是基因组水平上由单核苷酸变化引起的DNA序列多态性。这是由于转换，颠换，插入缺失和其他格式。 Petkov及其同事选择了28个SNP标记。这些标记物涵盖所有小鼠常染色体和X染色体，并且可以区分所有近交小鼠。结果表明，该方法是一种快速，可靠，高效的基因监测方法。 SNP标记用于随机监测已建立种群中的所有动物。 SNP标记的发展大大提高了我们鉴定近交背景的能力。 4.EST标记的cDNA是指与RNA序列互补的DNA。 cDNA不包含内含子，可用于后续序列分析。 1983年，发现短的cDNA序列用于基因鉴定； 1991年，Adams等人在开始进行高通量cDNA测序时提出了“ EST”的概念。从那时起，Expressed Sequence Tag（EST）技术在世界范围内得到了广泛的发展。诸如高速自动测序和DNA芯片测序之类的方法的不断发展，使得某些生物的基因组测序成为可能。 EST标记技术被广泛使用，特别是在功能基因组的研究中，使其成为遗传研究的*有效捷径。 1993年，美国国家生物技术信息中心（NCBI）建立了一个特殊的EST数据库（EST，dbEST数据库），用于存储和收集所有EST数据。随着各种数据库中EST数量的迅速增加，EST标记已成为生物学研究，发现新基因，构建基因连锁图，遗传资源资源分析和比较基因组学研究的基本工具。广泛使用。 5.线粒体DNA遗传标记的mtDNA序列的差异可通过限制性酶切位点分析以及线粒体基因组测序直接测量。限制性位点分析使用限制性核酸内切酶来鉴定和切割mtDNA中的特定碱基，然后电泳切割的片段以分析和比较限制性片段的添加或缺失。该方法可以进一步分为限制性内切酶作图，限制性内切酶片段长度多态性（RFLP），探针和PCR-RFLP。其中，PCR-RFLP现在广泛用于mtDNA分析，以避免繁琐的mtDNA纯化。
mtDNA的RFLP分析非常简单，快速，并且含有丰富的检测变异，但*终它是检测DNA序列变异的间接方法。直接测序法确定了mtDNA的完整序列或特定基因片段的序列，以比较不同物种或个体之间的差异，并直接检测DNA核苷酸位置的变化，从而提供*完整的数据。会更可靠。早期测序方法被认为是昂贵的，并且不适合用于研究大量人群和样品中的基因进化。自从PCR的发明和“通用引物”的出现以来，直接测序方法已在动物mtDNA研究中变得越来越流行。 形态学检测，细胞学标志物检测，生化标志物检测，皮肤移植是传统的监测方法和间接基因检测方法。这些原则上主要利用表型性状的变化来推断相应的遗传变化。上述作为遗传标记的表型特征具有准确性低，对外部环境因素的敏感性以及缺乏遗传稳定性等缺点。在近交动物的所有染色体和基因座中都发现了大多数标记。无法覆盖。方法（如染色体显带技术和免疫遗传标记）操作复杂，给自交系动物的遗传监测带来许多不便。分子生物学标记物基本上是指可以反映单个生物体或种群的基因组中特定差异的特定DNA片段。与表型标记相比，DNA分子标记技术可以检测处于不同发育阶段的个体，不同组织，器官甚至细胞，不受环境影响，也不受基因表达的限制。稳定；生物学作用是中性的，易于操作。它可以同时检测基因组上的多个位点，具有丰富的多态性，并且比传统标记更准确，更可靠。当前的分子标记技术具有诸如DNA提取的条件复杂和苛刻，扩增反应条件，难以控制扩增产物的稳定性和高昂的实验成本的缺点，这限制了该技术的应用。但是，实际应用必须遵循准确性，有效性，简单性和经济性的原则。随着科学技术的进一步发展，分子生物学技术将不断完善和完善，为我们实验动物的开发和管理提供更广泛的范围，并被认为具有突破性作用。
3.遗传测试条件\n（1）测试内容\n 1.生化标志物（生化标志物）。 2、用于免疫学检查，皮肤移植，免疫标志物基因检测（immunogen原基因标志物）等方法。 3.形态学检查包括下颌骨测量（下颌骨测量），染色体标记检测（细胞遗传学方法）和DNA多态性检测（DNAmarkers）。\r\n 4. Coatgene测试。\r\n实际上不可能使用所有上述方法，但是它们不能基于单个方法。*好根据生化标记，形态学和免疫学综合判断菌株的遗传特性。\r\n（2）实验动物\n进行基因测试时，有必要将测试频率降至*低并减少采样以提高效率。\r\n 1.测试基本组时，应测试后代繁殖小鼠的所有亲本动物。\r\n 2.在测试生产组时，如果女性人数少于100，则选择6名男性，一半，如果女性人数超过100，则选择一半以上。选择6％或更多的动物。测试要求每年至少进行一次基因质量测试。\r\n4、基因检测（1）形态学检测\n通常是指用于基因检测的形态遗传标记，主要用于染发剂和下颌骨的基因检测将会完成。可以轻松检测外部形态特征的测量方法和其他方法。\r\n 1.外套颜色遗传测试方法C.C. Little在1909年在杰克逊实验室进行了*次外套颜色遗传测试。这种对外套颜色的观察一直是近交质量的重要指标。染发剂基因测试只能检测与染发剂相关的特定基因是否纯合，不能反映自交系的遗传特性，也不能检测其他地方的突变。很难。\r\n（1）基本原理：小鼠毛色等位基因A，B，C和D分别位于2、4、7和9号染色体上。 A，B，C和D基因在相应的a，b，C和d等位基因中占主导地位，而C基因是其他色素基因的表位。 CC隐性基因使小鼠看起来褪绿，而与其他调节色素生成的基因无关，因为该细胞缺乏酚，并且该酶无法合成色素。小鼠皮毛颜色表型与基因型之间的关系如下： “ ABCD-”为野生色，“ A-bbC-D-”为肉桂色，“ aB-CD-”为黑色，“ aabbC-D-”为棕色--- cc--”为白化病。因此，根据遗传原理，携带隐性等位基因的小鼠与被测小鼠杂交，并且可以从F1后代的皮毛颜色推断被测小鼠的基因型。 ..\r\n（2）方法\n①已知可以使用纯DBA/2小鼠选择隐性等位基因小鼠，其基因型为“ aabbCCdd”。\r\n②待测小鼠可以是具有其他颜色的白化病的小鼠，但是自交系对于自交系的外壳颜色基因或新培养的菌株的基因型必须是纯合的。通常用作理解目的的测试鼠标。当然，也可以使用杂种菌株。交叉线用作对照组以观察毛色基因的分离。方法（3）在交配方法中，根据相同条件，按照1：1或1选择具有已知隐性基因的约70天大的雄性和雌性小鼠。 ：2进行自我交配，观察并记录交配和生产的时间和数据，并轻松分析结果\n（3）判断结果的标准\n①相同颜色的F1儿童可以进行测试以确定所选菌株的外壳颜色基因的纯合性。\n②在每项研究中，F1幼犬至少有7窝和至少10只幼犬。必须有。\r n③如果您的垫料中有不止一只F1幼犬，则外套的颜色表示您的小鼠受到了基因污染或突变。\r\n（4）基因型的判断\n①如果F1代具有相同的外壳颜色，则F1代仅具有一种外壳颜色，因此将其判断为要测试的基因，并且只有一个基因型。确保该基因是纯合子，然后估计您正在测试的小鼠的基因型。例如，使用DBA/2测试BALB/c的外套颜色基因型。 DBA/2 x BALB/c F1代是肉桂，基因型是AabbCcDd。与已知的DBA/2（银灰色）aabbCCdd基因型对进行比较，我们可以看到F1的四个等位基因A，b，c和D均来自BALB/c。由于是肉桂，我们可以推断出测试的BALB/c染发剂基因是纯合的，基因型是AAbbccDD。\r\n②如果F1代的发色不同，将根据F1代的发色的差异确定并测试受测小鼠的基因型。由于小鼠的基因型不是纯净的，因此您需要放置基因，使其成为您正在测试的小鼠的基因型，而不是在基因与已知基因型不同的纯净动物中。\r\n 2.下颌的形状取决于鼠标的骨骼。形态是高度遗传的和应变特异性的。该标记物已成为监测实验动物遗传背景的传统方法之一。\r\n该方法将所有F1代大衣颜色基因型与已知基因型进行比较，并提供了一种高级方法来识别可用于差异的菌株，如骨形态，大小和遗传力。找到水平的动物骨骼形态。格林一直在1953年研究这个问题。为了进行下颌分析，将20 g±1 g的小鼠头骨煮沸至少3分钟，在37°C下用胰蛋白酶消化24小时，然后用水洗涤。将下颌骨放在L形矩形坐标板上，并测量各种骨骼标记。对于长度和高度，将每个测量点的值输入表中，并在计算后与标准置信区间进行比较。在受信任区域中表示测试通过，但在受信任区域之外则表示该测试不合格。通常，形态监测方法易于操作，成本低，不需要使用专用设备，实用性强但准确性低。 （2）细胞学标记物检测方法细胞学标记物检测方法是指动物染色体的变化，例如核型（染色体数目，结构，卫星的存在，着丝粒的位置等）或染色体带。类型（C区域，N区域，G区域等）改变。细胞学标志物优于形态标志物的优势是能够发现某些重要基因的染色体或染色体区域。但是，细胞标记物需要大量的体力劳动和长期培养，这使其极为困难。染色体染色是一种细胞遗传学技术，它允许使用C和Q谱带分化作为染色体标记来区分小鼠和自交系。在大多数大鼠和小鼠近交系中，所有中期染色体都具有C带物质，同源染色体的C带区域大小相同。不同的自交系具有不同的C波段材料。检测子行变异和混乱来源的一种有价值的方法。凌丽华等报道，对T739小鼠及其父母的C带染色体进行了研究，C带多态性表明T739和615小鼠为近交小鼠。 （3）生化标记物检测方法生化标记物基因检测是常规检测近交动物遗传纯度的常用方法。近交小鼠在近交大鼠中选择了10条染色体和13个生化位点，大鼠选择了9个生化位点作为基因检测的生化标记。醋酸纤维素膜电泳技术通常用于检测生化标记基因。找到要测试的样品（血清，肾脏匀浆等）并进行电泳以显色。然后分析所得的电泳图谱以确定每个测试位点的基因型，并将这些基因型与每种菌株的标准基因图谱进行比较，以列出相同和不同的基因座。 ..做吧确定测试菌株的纯合度。它的优点是轨迹清晰，方法简单快速，相对经济，但准确性较低。\r\n（4）皮肤移植\n小鼠皮肤移植是纯动物遗传质量控制的基本方法之一、并且易于操作且可靠。小鼠和人类在它们对应的染色体上具有一组基因座，这些基因座形成了控制移植物存活的主要组织相容性复合体（MHC）或主要组织相容性系统（MHS）。去做。小鼠MHC（17号染色体上的H-2复合物）决定了小鼠中的主要组织相容性抗原（相当于人HLA系统）。有56个已知的小鼠组织相容性基因座，包括：\r\n H-1、H-2、H-3 ... H-56、由于组织相容性基因的优势，它们可以在杂合子中分别表达。每个组织相容性位点的抗原性是不同的。小鼠H-2位点是一种强抗原，可强烈排斥同种异体移植物，移植后的皮肤在约11天后被破坏。其余的H位点是弱抗原，也称为次要组织相容性抗原。这些部位只会延迟异体移植的排斥反应，其中一些可能持续长达100天。上。\r\n迁移可以分为多种类型。\r\n 1.自体移植是同一个人不同部位之间的移植。例如，将小鼠背部腰椎两侧的皮肤从一侧移植到另一侧，但是接受者可以识别出移植物的抗原是他或她自己的，因此可以长时间存活而不会产生免疫反应。 2.同种异体移植是同属个体之间的移植。根据遗传差异，它可以分为：\n（1）相同的基因转移（相同的基因）：纯动物的特征之一是相同的基因型，即皮肤转移。是成功的原因。移植受体的抗原与供体的抗原完全匹配。这是一个重要的原理，因为不会发生拒绝。 （2）同种异体移植：所有小鼠都是相同的，但不是品系，但是具有不同的基因型。这类组织的移植必须在受体中引起特定的免疫反应，并且移植只能持续很短的时间。*后，它被身体拒绝了。 （3）F1同源近交系的移植：当移植到F1小鼠时，F1亲本组织可能会生长。没有免疫反应，因为F1包含两个亲本的一半等位基因，但是由于亲本的基因型不同，因此从F1后代到父母的组织移植被拒绝了。\r\n在测试皮肤移植方法时，请从每个菌株中至少选择四只同性成年动物进行同种异体皮肤移植。所有成功的移植都被认为是合格的，并且由于非手术原因导致的移植排斥被认为是不合格的。 （5）分子生物学的检测方法\n自1980年代以来，分子生物学的技术和方法发展迅速，并已成为生物学，医学和农业等许多领域中非常重要的新研究工具。它是。它已成为。分子生物学标记技术可以直接测试动物基因组核酸的变化，为近交动物的遗传监测提供了直接而客观的方法。分子生物学标记技术主要包括以下几类： 1.微卫星标记微卫星是一个DNA序列，其中多个核苷酸（主要是2-4个）串联连接。 ，该多态性也称为简单序列多态性，短串联重复序列或简单序列长度多态性。微卫星通常两侧是保守序列，可用于设计特异性引物，用于微卫星等位基因的PCR扩增。该序列广泛存在于人类和其他真核基因组中。高丰度，高等位基因变异，高个体特异性，易于检测，标记共享，稳定性和可靠性以及出色的实验再现性。经济。欧阳兆和等人研究了微卫星DNA多态性在近交小鼠遗传监测中的应用，在小鼠不同染色体上选择了16个微卫星基因座，并采用了PCR技术..分析了使用的10个自交系。小鼠微卫星DNA多态性分析结果表明，14个微卫星DNA具有稳定的扩增作用，在同一菌株的不同个体之间表现出单态性，在不同菌株之间表现出多态性。在14个位点进行微卫星多态性分析，可以对近交小鼠进行快速而经济的基因监测。 2.随机扩增多态性DNA随机扩增DNA多态性（RAPD）是Wiliam和Welsh在1990年开发的一种检测DNA多态性的方法。随机合成的非特异性寡核苷酸引物（5-10 bp）用于扩增基因组DNA，以获得多态性DNA片段。 APD客观地反映了每种生物的基因组差异，并且大多数遵循孟德尔遗传规则。用于RAPD分析的引物在物种之间没有界限，也不需要事先知道要分析的基因的核苷酸序列。尽管RAPD标记的稳定性和特异性值得怀疑，但它们的操作简单，快速，经济和实用，并且其多态性检测率很高。在小鼠中，RAPD标记用于分析群体之间的遗传距离，以进行基因连锁分析和基因作图。张文彦等。使用100个引物扩增BALB/c，C57BL和KM小鼠样品。用几乎90％的引物获得了扩增的条带，并选择了21个引物来扩增3种不同的小鼠组织样品。此外，有13种可以区分BALB/c和C57BL小鼠的引物，还有8种可以区分BALB/c和KM小鼠的引物。虽然仅靠外套的颜色和外观很难区分BALB/c和KM小鼠，但只能通过观察扩增的条带来区分该方法。吴开平使用RAPD-PCR对小鼠进行了基因测试，以筛选出在不同小鼠品系之间表现出多态性的引物。 APD技术在研究实验动物方面具有巨大潜力，但缺点是RAPD指纹不可重现，并且需要改进在不同实验室中生产的不同RAPD基因标记的可比性。那是。那是。 3. SNP标记SNP标记（单核苷酸多态性）是在基因组水平上由单核苷酸变化引起的DNA序列多态性。这是由于转换，颠换，插入缺失和其他格式。 Petkov及其同事选择了28个SNP标记。这些标记物涵盖所有小鼠常染色体和X染色体，并且可以区分所有近交小鼠。结果表明，该方法是一种快速，可靠，高效的基因监测方法。 SNP标记用于随机监测已建立种群中的所有动物。 SNP标记的发展大大提高了我们鉴定近交背景的能力。 4. EST标记的cDNA是指与RNA序列互补的DNA。 cDNA不包含内含子，可用于后续序列分析。 1983年，发现了一个短的cDNA序列用于基因鉴定； 1991年，Adams等人在他们开始进行高通量cDNA测序时提出了“ EST”的概念。从那时起，Expressed Sequence Tag（EST）技术在世界范围内得到了广泛的发展。诸如高速自动测序和DNA芯片测序等方法的不断发展，使得对特定生物的基因组进行测序成为可能。 EST标记技术被广泛使用，尤其是在功能基因组学研究中，它代表了遗传研究的*有效捷径。 1993年，美国国家生物技术信息中心（NCBI）建立了一个特殊的EST数据库（EST，dbEST数据库），用于存储和收集所有EST数据。随着各种数据库中EST数量的迅速增加，EST标记已成为生物学研究，新基因发现，基因连锁图谱构建，遗传资源资源分析和比较基因组学研究的基本工具。它是广泛使用。 5.线粒体DNA基因标记的mtDNA序列的差异可通过限制性酶切位点分析和线粒体基因组测序直接测量。在限制性位点分析中，限制性核酸内切酶用于鉴定和切割mtDNA中的特定碱基，对切割的片段进行电泳，并对限制性片段的添加或缺失进行分析和比较。该方法可以进一步分为限制性核酸内切酶作图，限制性核酸内切酶片段长度多态性（RFLP），探针和PCR-RFLP。其中，PCR-RFLP被广泛用于mtDNA分析，以避免繁琐的mtDNA纯化。\r\n尽管mtDNAFLP分析非常简单，快速且具有丰富的变异检测功能，但它*终还是检测DNA序列变异的间接方法。直接测序方法确定了mtDNA或特定基因片段的完整序列，以比较不同物种或个体之间的差异，并直接检测DNA核苷酸位置的变化以获得*完整的数据。提供。会更可靠。早期测序方法被认为是昂贵的，并且不适合用于研究大量人群和样品中的基因进化。自从PCR的发明和“通用引物”的出现以来，直接测序已在动物mtDNA研究中越来越流行。形态学测试，细胞学标志物测试，生化标志物测试和皮肤移植是传统的监测方法和间接基因测试方法。这些原则主要使用表型性状的变化来推断相应的遗传变化。上述作为遗传标记的表型特征具有诸如准确性低，对外部环境因素的敏感性低以及缺乏遗传稳定性的缺点。在近交动物的所有染色体和基因座上都发现了大多数标记。它不能被覆盖。方法（如染色体显带技术和免疫遗传标记）操作复杂，给自交系动物的遗传监测带来许多不便。分子生物学标记物基本上是指可以反映单个生物体或种群的基因组中特定差异的特定DNA片段。与表型标记相比，DNA分子标记技术可以检测处于不同发育阶段，不同组织，器官甚至细胞的个体，不受环境影响，并且不受基因表达的限制。稳定，生物学中性且易于操作。它可以同时检测基因组上的多个位点，具有丰富的多态性，并且比传统标记更准确，更可靠。当前的分子标记技术具有限制其适用性的缺点，包括DNA提取的复杂且苛刻的条件，扩增反应条件，难以控制扩增产物的稳定性以及高昂的实验成本。但是，实际应用必须遵循准确性，有效性，简单性和经济性的原则。随着科学技术的进一步发展，分子生物学技术已经并将继续完善，将为实验动物的开发和管理提供更广泛的范围，并有望带来突破性的效果。\r\nV。如何分析，判断和处理基因测试结果
1.背离基因图谱的原因如果被测遗传性状与每个菌株的基因图谱相匹配，则遗传控制信息是明确的。您可以信任并考虑与育种相关的菌株。生产正常进行，该菌株的遗传质量得到认证。如果它与遗传图谱不匹配，则可能是由于以下原因：
（1）遗传污染：遗传污染是*常见的遗传变异，通常是由于遗传控制不力所致。如果将相同毛色的动物品系保存并维持在相同的繁殖单元中，则很容易在品系之间造成假杂交。如果尽早发现这种情况，可能会观察到多个遗传标记，其特征，杂合性或其他表型与所研究的遗传特征不一致。如果稍后发现，则某些杂合基因会被校正为可能随机存在但与原始菌株的遗传图谱不匹配的单一纯合子类型。如果发生以上任何一种情况，应消除原始毒株，将来源和质量合格的动物替换为新物种，并重新增加毒株。 （2）遗传漂移：遗传漂移是指少数人群中基因频率随机变化的现象。大多数变化是由于近交动物中的几个杂合基因在成为纯合子之前就已经分裂，导致亚系和分支的形成。测试表明，该谱系的所有动物均不匹配具有1-2个遗传标记的原始谱系的遗传谱，但在表型上是相同的，并且都是纯合的。同种异体移植测试消除了遗传污染后，需要根据子系和分支重新命名这种情况。 （3）基因突变：哺乳动物中的基因突变频率为10 ^ 5、对测试结果的分析表明，只有一只动物是单一基因标记的杂合子，应考虑是否发生了基因突变。为了证实这一点，通常必须根据动物数量来查询动物垫料或亲本遗传标记的表型。如果遗传标记物的表型与同窝或兄弟姐妹的遗传图谱相匹配，则应认为被测个体具有遗传变异。如果基因突变发生在亲代中，则必须将同一个同窝的兄弟姐妹分开以产生异型或不同的表型。如果在测试过程中发现另一种遗传标记的表型与遗传图谱不一致，无论是杂合还是纯合，请考虑遗传污染并立即消除替代。需要这样做。如果基因突变不具有特定的保留值，则即使消除了突变体也可以保留整个菌株。在极少数情况下，突变体只能繁殖为同源近交系。
2.遗传测试结果和处理的判断测试动物时，会检测到杂合型。这些动物通常需要删除和更新，不能用作自交系。如果发现突变位点是纯合的，则需要采取适当的措施。表1-2显示了根据《中国泌乳实验动物遗传质量检测国家标准》确立的治疗原则，通常可以根据这些原则进行处理。