H5N1病毒,小鼠模型 中国实验动物信息网 2020-07-24 1540

　　1.材料方法

　　（1）BALB/c小鼠感染的设计，观察，取样和检测方法：选择体重为18-18 g的4-6周龄BALB/c小鼠。通过鼻腔向每只动物滴注100 TCID50病毒（50μl体积）。 5只鸟/笼子，自己喝水每天观察动物的一般状况，包括眼睛，鼻子，嘴巴，脸，耳朵，指甲，四肢，肛门，尾巴，被毛，活动和精神状态。挑战后每两天称一下体重。攻击后3、5、7、9、14天死亡的3只动物的样品。再繁殖十只小鼠，观察到体重和死亡的变化，直到感染后14天。处死动物时，收获肺组织用于RT-PCR检测和病毒分离，并对肺组织进行病理检查。所有动物研究均在ABSL-3实验室隔离器上进行。 （2）病毒分离：在尸检过程中收集肺组织，压碎，接种到MDCK细胞中，每天观察细胞的病理，连续观察3天，并通过HA方法确认。 （3）H5N1病毒RNA的检测：感染H5N1病毒的动物饲养3天，然后处死。取出肺组织，放入1 ml裂解液（Qiagen）中，在研磨机中彻底研磨，离心，取上清液，350μlbufferRLT（1％巯基乙醇）在4°C，13000pm下搅拌3分钟。离心并将上清液转移至新的1.5 ml微量离心管中，以提取样品病毒核酸。将RNA转换回cDNA，并在荧光定量PCR仪上直接测量病毒载量。提取病毒RNA的过程在ABSL-3实验室完成。 （4）H5N1病毒抗体的检测：为了收集血液和分离的血清，在不同的时间点处死动物，并保存在-80°C下供以后使用。请参阅“检测雪貂HI”以检测血清H5N1病毒特异性抗体。

　　（5）病理研究：一般观察，对动物处死后肺，心脏，脾脏，肾脏，肝脏，脑，肠和其他组织的形态变化进行详细观察制备病理切片，处死动物的肺和其他组织，用10甲醛固定，包埋在石蜡中，用常规组织病理切片处理，用HE法染色，在显微镜下观察。观察。

　　2.被H5N1模型指标感染的BALB/c小鼠攻击组中的小鼠发病率和结果：BALB/c小鼠在攻击后的*天开始活动减少，拒绝进食和脱毛我准备好了死亡从第三天开始，在挑战后的第七天全部死亡。T-PCR结果显示在肺组织中存在多种H5N1病毒，病毒分离结果显示小鼠中小鼠病毒复制的高峰期为2-6天。解剖后，可以观察到小鼠的肺硬化，并且表面为深红色。病理变化显示支气管粘膜局灶性上皮坏死和脱落，粘膜中炎性细胞明显浸润，肺泡腔内渗出，肺中隔轻度扩张，导致严重的间质。引起肺炎（图8-4）。