动物造模 中国实验动物信息网 2020-09-10 493

　　简介：周围神经阻滞常用于术后疼痛和手术麻醉。长效局麻药本身具有9-14小时的镇痛作用。如果阻断是在早晨和下午进行的，则患者通常会在晚上报告术后疼痛。阿片类药物的使用会导致气道阻塞并降低饱和度。理想情况下，在手术后的*个晚上，单个外周神经阻滞应提供镇痛作用。正在研究许多其他的局部麻醉药来治愈术后疼痛。在许多局部麻醉方法中已证明了chronidine的有效性。然而，长效局麻药的结果并不令人满意。在一些研究中，在长效麻醉剂中添加chronidine并没有有益的作用。右美托咪定是选择性的α-肾上腺素受体激动剂。先前的研究表明，右旋美托咪定和布比卡因的组合可以延长大鼠坐骨神经阻滞模型的感觉和运动阻滞时间。研究表明，局部麻醉药可引起肌肉坏死，但据信这种损害在肌肉正常再生时可能不具有临床意义。尽管局部麻醉剂量通常对健康人是可靠的，但无症状神经性糖尿病或多发性硬化症的患者当然可以具有神经毒性。服用吡啶后，炎症介质增加。研究表明，与单独使用布比卡因相比，在布比卡因中添加右美托咪定24小时可以显着减少外周炎症。同一项研究发现，在24小时时周围神经发炎的价值高于单独的布比卡因生理盐水对照组。接受布比卡因和右美托咪定治疗组和仅接受右美托咪定治疗组的神经炎症水平与生理盐水治疗组相似。如先前的研究所述，使用右美托咪定减轻神经周围神经炎是由于愈合的免疫细胞的促炎产物减少以及伤口部位抗炎细胞因子的增加。正在考虑中。确定神经的功能状态非常重要。评估神经修复或传导障碍功能的一种方法是进行电生理测量。心电图是体内和体外功能神经研究的临床和基础研究的常用方法。在动物模型的电诊断和评估周围神经对坐骨神经的损伤方面，它具有广泛的用途。研究表明，在端到端修复切口神经后，使用透明质酸填充的硅管对潜伏期和CMAP有积极作用，而对轴突再生有积极作用。 CMAP通常是指示神经再生和神经支配时间的重要参数。研究表明，刺激性单纤维心肌造影（SSFEMG）是检测弱肌和急性有机磷感染大鼠神经肌肉阻滞的一种更灵敏的电生理方法。这些EMG研究表明，使用EMG方法可以指示神经愈合和神经损伤。在我们的研究中，心电图用于测量右美托咪定注射液对神经传导的影响。进行疼痛缓解，组织病理学和心电图检查以评估右美托咪定对大鼠坐骨神经的影响。

　　方法：下部脊髓注射：称重大鼠后，用2.5％异氟烷麻醉。在正确的仰卧位，通过面罩使用2.5％的异氟烷维持麻醉。在后肢做一个横向切口以接受注射。浅表心肌被分离，坐骨神经在分叉的近端暴露。坐骨神经暴露后，向D组（n = 7）向神经周围间隙注射右旋美托咪定40μg/ kg，向S组注射40μg/ kg生理盐水。 30 GPPD注射器进行注射。 E组（n = 2）中，只有坐骨神经被暴露并再次缝合。记录进样时间。在皮肤准备过程中，皮肤下的不可吸收缝合线用于标记与注射位置相对应的股二头肌心肌，以确定在哪里收集神经样本。缝合线未放置在神经周围，也未触及神经。注射后，将切口缝合。异氟烷麻醉被中断，记录麻醉的持续时间，并将大鼠置于其背部的笼子中。然后将大鼠恢复到俯卧位所花费的时间记录为恢复到扶正反射（RORR）。

　　PAW延迟撤离（PWL）测试：在大鼠返回到卧位后，将唯一的止痛药放在脚掌上，然后执行PWL测试。光源用作镇痛的加热器。打开光源后，鼠标脚上相应点的温度达到30°C，等待5分钟，然后将鼠标脚移到相应点。用左脚和右脚重复此过程。从实验开始到实验结束（6.00-18.00h），在明暗环境中饲养无神经异常迹象的大鼠12小时。手术前，每天进行1小时3天的神经行为监测。在对大鼠进行手术和注射后，每30分钟进行一次PWL测量，然后在左右脚上进行操作。监测所有大鼠210分钟的神经行为。在此期间，每30分钟评估一次后肢运动。当患有运动障碍（运动评分= 1），正常脚部位置或没有运动障碍（运动评分= 0）的大鼠恢复至基本感觉和运动值时，将其放回笼中。每天早晨进行5次双脚的PWL测量，直到神经被移除为止，从注射后的早晨开始，然后在注射部位移除大鼠神经。每日PWL值是这些测量值的平均值。

　　电生理研究：用2.5％异氟烷麻醉大鼠后，将大鼠的尾巴固定在工作台上。将针状电极放置在腓腹腹肌中，并用位于髋关节附近的适当电极将坐骨神经刺激10次。记录左右坐骨神经峰值与远端运动潜伏期之间的复杂肌肉活动电位（CMAP）。电生理研究使用肌电图系统和软件程序Labchart 7评估测量结果。在坐骨神经注射前和坐骨神经注射后14天进行相同的操作，并从坐骨神经中取样并比较结果。 组织病理学研究：在第14天，用异氟烷麻醉大鼠以进行*次电生理学研究，给坐骨神经注射药物，然后用异氟烷再次麻醉大鼠以进行电生理学研究。已经完成。在右后肢做一个前切口，找到标记的缝合线，并从相应的区域取一个1.5厘米长的坐骨神经样本。重复左后肢。用2.5％甘油醛将神经样品固定3天，然后将其包埋在石蜡块中，以形成5μm的横截面。这些样品用曙红染色并评估。确认如下：坐骨神经周围的炎症（0 =无炎症，1 =轻度水肿和/或小病变炎症，2 =中度水肿和/或局部广泛性炎症，3 =中度弥漫性区域的积水和/或炎症，发现局部神经损伤）（0 =无损伤，1 =轴突或髓鞘的1-2％损伤，2 =轴突或髓鞘的2-5％损伤鞘，3 = 5 上轴突或髓鞘）损伤。去除坐骨神经后，通过颈脱位法使大鼠安乐死。结果：当比较大鼠注射期间的麻醉时间时，没有统计学意义。比较每组大鼠的RORR值，我们发现各组之间的差异具有统计学意义。分别比较两组，我们发现D组的RORR值与其他两组在统计学上有显着差异。与其他两组相比，RORR值更长。 D组：当将大鼠右后肢的PWL值与标准值比较时，PWL值在给药后30分钟低于标准值，而在210分钟时高于标准值。 60分钟，90分钟，120分钟，150分钟和180分钟的测量值之间没有统计学上的显着差异。将大鼠左后肢的PWL值与基线值进行比较，在60、90、120、150、180和210分钟时无明显差异。与基础值相比，大鼠右后肢的PWL值与第1、8、9和14天的基础值无统计学差异，而其他时间的PWL值在统计学上较长。当将大鼠左后肢的PWL值与基本值进行比较时，发现在4至6天，9至12天和14天的测量值之间的差异具有统计学意义，并且比基本值长。 .. D组大鼠均未显示运动障碍。 S组：将大鼠右后肢的PWL值与基本值进行比较，在30分钟，60分钟，90分钟，120分钟，150分钟，180分钟和210分钟之间没有统计学上的显着差异。是。在30、60、90、120、150、180和210分钟时，大鼠左后肢的PWL与基线值之间无显着差异。将大鼠右后肢的PWL值与基本值比较时，在4至7天，10天，11天和14天之间差异较大，并且需要花费一些时间与基本值进行比较。将大鼠左后肢的PWL值与基本值进行比较，从第3天到第14天，差异具有统计学意义，比基本值长。 S组的大鼠没有运动障碍。 E组：将大鼠右后肢的PWL值与基线值进行比较，在30、60、90、120、150、180和210分钟时无统计学差异。在30、60、90、120、150、180和210分钟时，大鼠左后肢的PWL与基线值之间无显着差异。将大鼠右后肢的PWL值与基线值进行比较，从第1天到第14天，差异无统计学意义。当将大鼠左后肢的PWL值与基线值进行比较时，在第1-14天差异无统计学意义。 E组大鼠没有运动障碍。大鼠右坐骨神经的组织病理学比较显示，每组的炎症和局部神经损伤均无显着差异。每组左坐骨神经的组织病理学比较表明，每组的炎症和局部神经损伤均无统计学意义。比较D组左右神经组织的病理结果，炎症和局部神经损伤之间的差异无统计学意义。

　　比较S组左右坐骨神经的组织病理学结果，炎症和局部神经损伤之间的差异无统计学意义。比较E组左右坐骨神经的组织病理学结果，炎症与局部神经损伤之间无显着差异。比较D，S和E组注射前后的CMAP和潜伏期，注射后CMAP值的差异具有统计学意义。延迟值的差异在统计上不显着。 D组和S组之间在注射后CMAP测量存在统计学上的显着差异。比较注射后S组和E组的CMAP测量结果，两组之间的差异无统计学意义。比较D组，S组和E组的注射前和潜伏期，差异无统计学意义。注射前后D组CMAP值存在统计学差异。注射前后，S组和E组之间的CMAP值无统计学差异。结论：大鼠右周骨注射右美托咪定可使pwl值增加210分钟，而右右美托咪定注射后大鼠的RRRR反射持续时间明显延长。向坐骨神经神经周围注射右美托咪定并没有导致统计学上显着的神经周围炎症或局部神经损伤的增加；但是，在神经周围向右坐骨神经注射右美他汀后14天。另外，CMAP值显着降低。