动物造模,慢病毒载体 中国实验动物信息网 2020-09-09 1323

　　目的：观察慢病毒载体介导的HCV受体基因OCLN/CD81转染对体外培养条件下sh骨髓间充质干细胞生物学特性及基因表达的影响

　　方法：在这个房间里分离并鉴定保存的Tupai BM-MSC，构建包含人OCLN/CD81基因的慢病毒载体，并将CD81和OCLN基因分别转染到BM-MSC中。用倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效率。是否使用CCK8方法检测转染后BM-MSC的细胞增殖？是否诱导成骨脂肪细胞分化以检测其多向电位？转染后，实时荧光和WB方法用于检测HCV受体（OC/CD81）基因mRNA和蛋白表达BM-MSCs干基因表达？

　　结果：转染MOI为100的含有人OCLN/CD81基因的慢病毒载体后，LV-CD81的转染效率达到99.4％，LVOCLN的转染效率为22.6％？细胞增殖的趋势与未转染的BM-MSC相似，但转染的BM-MSC可以分化为成骨细胞，但能力较弱？干基因NANOG mRNA的表达升高，差异有统计学意义（P\u003c0.05），LIN28A mRNA的表达降低，差异显着（P\u003c0.05）？树胡椒BM-MSC在转染后能否表达有效转移的外源基因？

　　结论：构建的基于人OCLN/CD81基因的慢病毒载体能够成功转染Tupai BM-MSC，并有效表达导入的基因。转染后对镐BM-MSC的多向分化潜能有特殊影响吗？