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细胞污染,中洪博元
中国实验动物信息网
2020-07-20
2028
无论新人还是熟手，细胞污染都是必须要面对的，那对于细胞污染，我觉得*好的措施就是预防为主，因为细胞一旦污染，想救是非常困难的，即便救活，细胞状态也会差很多。所以中洪博元就防治污染方法和他们做一些。
首先，所有进入安全柜的东西在进入前都要用75%的酒精消毒。特别要注意的是我们的手，只要出了安全柜，再进入安全柜前都要喷75%的酒精消毒。实验耗材尽量放置在合适的容器内用报纸包好后灭菌，其他不规则的耗材可放入铝制饭盒内因为灭菌可能无法去除可能粘附的油脂或其他杂质。
其次，安全柜内的东西要摆放有序，这个可以根据个人使用习惯而定（如果使用的是公用安全柜，则可能需要使用前临时调整），以中洪的实验为例，移液器和*头盒（各种规格备齐）放右边，实验中需要使用的试剂放右前方，废液缸放左前方，并保证和试剂有一定安全距离，右角放置培养皿，左角放置其他耗材（如试管等），尽量保证*常用的东西放右手边（左撇朋友相反），次常用的东西放左手边（左撇站友相反），右边操作区域为洁净区，左边为非洁净区（如废液缸和其他用剩材料）。
再次，由于使用安全柜的过程中手和前臂都是要进入安全柜的，所以有条件的朋友应该准备至少一件细胞房专用连体洁净服（装入布袋消毒后烘干，在细胞房中取出，非更换前不得穿出细胞房），没有条件的朋友则至少准备一副套袖，每次用完后放安全柜中紫外消毒。
细胞培养离不开各种试剂和耗材，诸如培养基、血清、细胞皿/瓶等，所以预防细胞污染的第二步就是正确处理和使用这些试剂和耗材。如果实验室条件允许，那么*保险的莫过于直接都买商业化试剂和耗材，例如Gibco、Hyclone、ScienCell的试剂，Eppendorf、Corning的耗材等，这些品牌的试剂和耗材只要是正品，品质都没有问题。如果需要自己买干粉配制试剂，那么在试剂配制中的无菌操作也格外重要。另外建议每次试剂配制量不宜过多，比如培养基以1-2周内用完为宜，另分装成小瓶时可考虑再用针头滤器过滤一次，减少细菌污染的可能性。
在准备工作一切就绪后，细胞的处理过程也是大家需要注意的。细胞处理前应将当次实验需要的各种试剂、耗材准备齐备，尽量减少细胞处理过程中的来回走动。安全柜使用前*好紫外照射30min灭菌，然后通风5min保证换气到位。实验过程中，所有试剂*好不用就盖上瓶盖，如果需要打开瓶盖，则除了干净的*头，其他任何东西都不要从瓶口的正上方经过，防止试剂污染。细胞培养若使用培养皿，则*好不要长时间打开皿盖。另外移液器也是细胞污染的一个隐藏途径，特别是使用无滤芯*头的站友，在吸取试剂时，很容易不小心将试剂倒吸入移液器，如果发生这种情况，要及时用酒精棉球擦去倒吸的试剂，特别是培养基，极易成为细菌生长的温床。一把污染的移液器可以轻松污染站友的所有细胞，甚至整个实验室的细胞，所以友情推荐有条件的站友在处理细胞时一定要使用带滤芯的*头。当然即便是使用带滤芯的*头，也要尽量避免试剂倒吸，因为想要彻底去除倒吸入移液器的试剂非常困难。
培养箱作为细胞培养的场所，也需要留心。由于培养箱内的温度和湿度很高，是很适宜细菌生长的，所以如果有条件（实验室有2个或以上培养箱），*好定期用75%酒精擦拭培养箱，及时定期更换培养箱内水槽。
早期污染是细胞状态变差，但依旧能保持生长，显微镜下（光镜）不可见明显微生物或可见少量微生物，这时候我们在换液时建议多用PBS洗几次，然后加入适合的抗生物。早期污染只要发现及时，处理得当，救回来的可能性还是很大的。晚期污染则是细胞形态发生明显改变，细胞停止生长，显微镜下可见明显微生物。这时候中洪建议大家及时清理掉相关细胞，以免污染其他细胞，重新复苏更早批次的细胞。所以大家会发现，新细胞收到后，不应急于开展实验，而应该先小心培养，冻存1到2个批次的早期细胞，然后再开展实验，这样实验细胞一旦出现问题，可以有库存细胞保证实验还能继续进行。