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中洪博元,细胞保种
中国实验动物信息网
2020-07-20
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中洪博元培养细胞也好多年了，想必各位*小心的时刻莫过于新细胞刚到的时候，对其知之甚少，不知如何处理。作为多年进行细胞培养的专业机构也经常会遇到课题组采购新细胞后保种的问题，那么今天就和大家一起来分享一下对新细胞的处理心得。
首先，细胞采购的运输形式一般分为两种，一种是直接寄送冻存细胞，一种是复苏后寄送活细胞。前者是由液氮中取出细胞冻存管，采用干冰运输；后者是将细胞复苏至T-25培养瓶中，采用常温运输。两者各有优缺点，*种方式的优点是可以长途运输，因为细胞在干冰中相对稳定，一般可以保证数周之内不影响细胞活性，但缺点是运输成本高，且细胞复苏是很复杂的过程，如果细胞复苏后状态不佳，则很难界定是来源的问题还是复苏操作的问题；而第二种方式的优点是细胞收到后可以直接通过观察来大体了解细胞状态，并且对运输的要求相对较低，缺点则是只适合短途运输，因为即便运输时培养基中不添加血清，细胞还是会不断增殖，当细胞长满后，细胞的状态会随时间的增加而不断变差。综上，如果是从国外大型细胞库采购，一般采用*种方法，既能适应长途运输，且大型细胞库的冻存细胞质量普遍较好，在良好的操作下复苏成活率很高；如果是从国内细胞库采购，则一般采用第二种方法，方便收到细胞时能较好掌握细胞状态，并且降低运输成本（即采购成本）。我们所大部分细胞还是从国内的细胞所（如中科院上海细胞所等）采购，一来质量有保证，二来又能降低采购的时间和成本；当然一些大课题还是从国外细胞库购买细胞，这样做出的成果更能获得国际学术界的认可。
有点跑题了，那接下来分别针对两种运输方式来谈下对新细胞的处理过程。
对于直接寄送冻存细胞的情况，首先要检查的就是细胞收到后是否有足量剩余干冰，如果干冰不足，或是已经没有干冰，则细胞状态可能会收到影响，建议尽快复苏；如果有足量干冰，建议先转移至-80℃冰箱过夜，于第二天按正常流程复苏，即37℃水浴锅中快速融解，低速离心后去除含DMSO的冻存液，换入适合细胞的新鲜培养基，轻柔吹匀后转移至培养皿中，补足培养基；一般贴壁细胞在24h内即可观察到细胞贴壁，从而判断细胞状态，悬浮细胞则复苏后即可观察细胞状态。对于冻存时间较长的细胞，可能需要传代1到2次后，细胞才会调整到正常状态，所以细胞复苏后如果状态不佳，不要灰心，仍要细心培养。
对于复苏后寄送活细胞的情况，则细胞收到后要先检查细胞瓶是否有破损，因为一般国内细胞寄送都走的快递，快递质量鱼龙混杂，细胞瓶在运输中很有可能受到碰撞和挤压，导致瓶体受损。如果发现细胞瓶受损，则需要尽快处理，该弃就弃。如果细胞瓶完好，则用酒精消毒瓶身，去除封口膜，然后常温静置1-2h，待细胞稳定后，观察细胞状态，并及时记录。如果收到时细胞污染，应及时拍照，公立细胞库寄送的细胞如果污染的话，在他们确认后会重新寄送的。细胞如没有异常，则尽快传代并更换适合细胞的新鲜培养基。由于新细胞一般都是*次接触，细胞传代过程中尤为需要注意胰酶消化时间，消化时间过短或过长都会影响细胞状态，甚至导致细胞死亡。中洪博元建议大家采用低浓度胰酶消化，消化时缩短放培养箱和观察的间隔时间，以便尽可能找到合适的消化时间。