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中洪博元,细胞污染鉴定
中国实验动物信息网
2020-07-20
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关于如何鉴定收到的新细胞是否有污染，中洪博元有自己一套完整科学的鉴定方法，在此分享下给各位：
一、肉眼观察以下几项：
1. 细胞瓶身：
如果瓶身上没有裂缝，正常；如果瓶身上有裂缝，则污染几率非常大。
2. 培养基颜色：
如果培养基颜色是红色或者粉色，正常；如果是橙色，则可能是污染或者细胞过密；如果是黄色，则污染几率非常大。
3. 培养基澄清度：
如果培养基澄清，正常；如果有少许漂浮物，则可能是污染或者有细胞凋亡；如果培养基很浑浊，甚至出现絮状物，则污染几率非常大。
二、进行显微镜下观察（通常观察前需先静置细胞1-2h）
显微镜下可以清晰观察到细胞是否有菌类污染，菌类污染通常分为杆菌、球菌和霉菌，为了方便大家分辨，我特地找了之前收到有典型污染的细胞照片，希望能帮助大家判断。
1. 杆菌
常见的有大肠杆菌，长度通常在2-5um左右。
2. 球菌
常见的有葡萄球菌，直径通常在1-2um左右。
3. 霉菌
常见的有毛霉，菌丝宽2-10um左右，长度短则几十um，长则可达几mm。
需要提醒的是，因为运输过程中细胞离开了其正常生长所需要的环境，部分细胞会出现凋亡或产生细胞碎片，容易误认为是细菌污染；另外培养基中的杂质纤维也容易误认为是霉菌污染，具体区分方法如下：
1.细胞碎片和杆菌
细胞碎片只会随着细胞状态的变差而变多，通常增长不快；杆菌则增殖非常快，以常见的大肠杆菌为例，常温25℃增殖1倍需要40min左右（此数据可查阅相关文献验证），培养基很快变黄且浑浊。
2.凋亡细胞和球菌
凋亡细胞通常只比正常细胞小一点，只会随着细胞状态的变差而变多，通常增长不快；球菌则要小很多，且成串或成团，培养基很快变黄且浑浊。
3.杂质纤维和霉菌
杂质纤维通常是过滤时残留的滤纸纤维，或者是酒精棉球上的棉纤维，在不开瓶处理的情况下其数量不会增长；霉菌的话虽然增殖速度没有杆菌和球菌快，但还是会有明显增殖。