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【动物实验】-应用Wistar大鼠实验对草本洁面乳的安全评价

  背景:健康的洗面奶带有草药配方。洁面乳包含多种具有雄激素,解热,镇痛和抗炎潜力的药用植物提取物。我们正在使用雄性Wistar大鼠评估其安全性,并警告说BSC已被广泛使用且尚未得到美国食品和药物管理局(NAFDAC)的评估。遵循标准毒性指南,将BSC单胶囊(总量442 mg)溶于蒸馏水(80 mg/ml)中,并通过管饲法施用于大鼠。实验设计:口服急性毒性研究:圈养30只雄性Wistar小鼠(平均20 g),随机分为6组,并在给药前适应2周。口服BSC的浓度为250、500、1000、2000和4000mg/kg,并且允许动物自由进食。对照组口服0.1ml蒸馏水。给药后24小时内观察小鼠的死亡率和行为变化(多动,循环运动,后肢倾斜,饮食习惯增加,下颚刮擦等)。在给药后14天内进一步监测所有动物。急性腹部毒性研究:将30只雄性小鼠(平均20 g)放在不同的笼子里,随机分为5组。腹膜内给予200、400、800和1600 mg/kg的BSC剂量。对照组口服0.1ml蒸馏水。在给药后24小时内观察小鼠的死亡率,行为变化和毒性。 BSC为200 mg/kg的动物表现出躁动,攀爬,贪食症,后肢倾斜和圆周运动。 2小时后,给予高于400 mg/kg剂量的动物表现出躁动,虚弱,腹部扁平和撕裂的迹象。观察到体重减轻发生在大约6-10小时内,大多数动物都发抖。给药后24小时观察并记录每组动物的死亡率。给药后14天,进一步监测所有动物。中位数致死剂量根据芬尼法估算。亚慢性毒性研究:将32只体重150-300克的成年雄性Wistar大鼠分为4组,每组8只。*组,对照组,每天喝10毫升蒸馏水。第二、第三和第四组分别接受250 mg/kg,500 mg/kg和1000 mg/kg BSC。在实验期间,每周对大鼠称重。注意动物行为的变化。采集血液样本和组织以进行临床测试:实验组大鼠给药60天。*后一次给药后24小时内收集血液样本,并将其放入抗凝和非抗凝试管中。移开脖子处死动物。将抗凝剂的血液样品在4200pm下离心5分钟以分离血清进行生化分析。解剖肝脏,肾脏,心脏和大脑,称重并用4倍体积的缓冲液(0.1M,ph7.4)匀浆。一些器官将被取出进行组织学研究,而其他一些器官将被均质化以进行生化分析。

  生化分析:肝和肾功能检查:通过测量血清天冬氨酸转氨酶(AST),丙氨酸转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)评估肝功能。测定血清肌酐(CREA)和血尿素氮(BUN)水平以评估肾功能。蛋白质和尿酸:为评估肝脏的合成功能,需要测量血清总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)的水平,并还要测量尿酸的水平。

  血脂:使用试剂盒方法测定血清总胆固醇(TC)和甘油三酸酯(TG)。并测量血清中的高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)。抗氧化和氧化应激:测量谷胱甘肽(GSH)水平和谷胱甘肽-S-转移酶(GST)活性。测量了超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化氢酶活性。脂质过氧化通过测量形成的硫代巴比妥酸反应物来确定。 血液学评估:自动化血液学分析仪用于测量红细胞(PCV),血红蛋白(Hb),血小板(PLT)和总白细胞(TWBC)。

  电解质:火焰光度计中钠离子(Na +),钾离子(K +),氯离子(Cl-),总钙离子(tca2 +),细胞内钙离子(钙)的含量我测量了组织学评估:采集肝,肾或心脏组织的样品,并通过固定,脱水,透明,穿透,包埋,切片和染色等方法进行组织学检查。为了确保良好的固定,将组织修整至大约5毫米的厚度,以实现良好的固定。将组织用10%甲醛溶液固定,并转移到50%(70%,80%,85%,95、100%)乙醇中2小时。石蜡组织随后被放在木块上,并按大小排列。旋转切片机用于连续切片,厚度为10μm。从每只动物的每个处理器官获得八个切片。染色后,DPX用作固定剂并进行显微镜检查。结果:急性口服毒性试验:表1显示了250、500、1000、2000、4000 mg/kg剂量的BSC的急性口服毒性试验的结果。动物没有以给定的剂量死亡。与对照组相比,在250 mg/kg剂量下未观察到毒性变化,但在500 mg/kg以上的剂量下,运动活性,轻度刮擦和给药后2小时内的轻度刮擦降低。我看到了划痕。过度活跃和虚弱。急性腹部毒性试验:表2显示了急性腹部毒性试验。我们观察到用BSC200、400、800和1600 mg/kg治疗的小鼠的死亡率或毒性变化。在200 mg/kg时,动物表现出躁动不安,登山,贪食症,后肢倾斜和圆周运动。给药后两小时,剂量为400 mg/kg的大鼠表现出躁动,虚弱,腹部扁平,流泪和浅呼吸的迹象。大多数动物在摇晃约6-10小时。平均致死剂量(LD50)为600 mg/kg。肝功能:表3显示,与对照组相比,治疗组的血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)没有明显变化。 (P\→ 0.05)。 250 mg/kg BSC分别降低了ALT和ALP水平。当服用250 mg/kg(32.4%),500 mg/kg(39.2%)和1000 mg/kg(51.4%)时,AST水平的剂量依赖性增加具有统计学显着性(P\0.05)。在500 mg/kg(41.4%)和1000 mg/kg(29.3%)剂量下,ALT水平显着增加(P\→ 0.05)。血脂:表4显示血清TG水平略有下降,分别下降11.6%,9.8%和1.5%。但是,*低剂量250 mg/kg可能会稍微增加血清TC水平。在250 mg/kg和500 mg/kg剂量下,血清低密度脂蛋白(LDL)分别下降14.7%和4.6%,而1000 mg/kg剂量使LDL稍微增加28.5%。肾功能,蛋白质合成和尿酸:分别以500 mg/kg和1000 mg/kg给药后,血尿素氮水平分别提高了11.8%(P \u003c0.05)和13.7%(P \u003c0.05)。服用250 mg/kg后肌酐水平增加7.1%。但是,血清白蛋白(ALB),总蛋白(TP)和UA没有明显变化。施用500 mg/kg和1000 mg/kg后,ALB,TP和UA的水平升高。血液学评估:服用250mg/kg(P \u003cu\→ 0.05)和500mg/kg(P \u003cu003c0.05)后,可以增加红细胞的数量。但是,与对照组相比,血红蛋白水平没有明显变化。 250 mg/kg可使白细胞计数增加62.6%,而500 mg/kg可使血小板计数增加50.6%。 电解质:口服250mg/kg?1000mg/kg不会引起钠离子的显着增加。钙含量在250 mg/kg时降低,而中,高剂量时钙含量增加。血清钾,氯和细胞内钙水平未改变。组织抗氧化剂:肝脏抗氧化剂:在低剂量(250mg/kg)和高剂量(1000mg/kg)下,肝脏GSH含量分别增加到68%和49.2%。与对照组相比,GST和超氧化物歧化酶之间无显着差异。但是,1000 mg/kg可使肝脏CAT水平增加54.1%。肾抗氧化剂:*高剂量(1000mg/kg)可增加肾GSH水平。所有剂量的肾GST水平均降低。仅*低剂量(250 mg/kg)显示增加CAT水平。 250mg/kg和500mg/kg可以增加肾脏的SOD水平。心脏抗氧化剂:在*高剂量(1000mg/kg)下,谷胱甘肽水平增加了9.7%,心脏GST水平下降了54%。 500mg/kg和1000mg/kg可以增加心脏中的CAT水平。大鼠心脏的SOD水平分别显着降低了30.1%(250 mg/kg),40.5%(500 mg/kg)和39.1%(1000 mg/kg)。脑抗氧化剂:脑组织中GSH水平的剂量依赖性增加分别为18.8%,96.4%和212.3%。 250 mg/kg降低大脑中的GST水平。 500mg/kg和1000mg/kg可以提高大脑中的CAT水平。所有治疗组的脑SOD水平均降低。

  组织学评估:对照组(蒸馏水,10ml/kg):对照组(蒸馏水,10ml/kg,A)和BSC(250mg/kg,B,500mg/kg,C)正常心脏已指示。但是,BSC(1000mg/kg,D)确实显示出心脏炎症。 BSC(250mg/kg):对照组(蒸馏水,10ml/kg,E)和BSC(250mg/kg,F; 500mg/kg,G; 1000mg/kg,H)显示肾脏正常。 BSC(500mg/kg):对照组(蒸馏水,10ml/kg,I)和BSC(250mg/kg,J,500mg/kg,K)显示肝脏正常。但是,BSC(1000 mg/kg,L)显示肝窦和中央静脉充血。

  结论:使用Wistar大鼠等级,BSC被认为是相对安全的。由于肝脏和心脏的轻度变化,草药BSC被认为需要谨慎使用。

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