动物实验,延迟复苏 中国实验动物信息网 2020-09-03 631

　　背景：延迟复苏是创伤患者复苏的一种新方法，为手术止血和进一步治疗提供了更多时间。虚假死亡是导致生命过程被内在或外在手段延迟或终止而没有终止的过程。低温疗法已用于完成心脏手术中的脑保护，复杂的先天性心脏病和主动脉弓手术。 SADR在体外循环过程中使用低温，从而节省了运输时间，控制了手术伤害并延迟了复苏。在过去三年中，根据不同动物模型中SADR的临床前研究得出了各种结论。在低温（10°C）下，清洁液使用葡萄糖和氧气，并且在停止循环（CA）180分钟后即可完全恢复。较短的CA时间间隔可实现良好的恢复。 90分钟的低流量或60分钟的无流量，然后延迟恢复可以恢复猪模型。在大鼠模型中复苏后，观察到高死亡率和多器官衰竭，包括肾衰竭和肝坏死。由于猪的心脏，肺和免疫生理学与人非常相似，因此研究猪模型中的冷破坏对理解人的治疗*有价值。此外，与其他灵长类动物相比，猪模型对出血的生理反应更接近人类。完全停止心脏搏动后，在15℃下评估血液中的器官保存溶液（ΔOPS）和SADR，并在约90分钟和120分钟时评估动物模型的存活和神经系统。方法：将16头重41-76 kg的雄性巴马尼猪随机分为两组：ca90组（n = 8），共90分钟，总心脏骤停，ca120组（n = 7）， 120分钟的完全心脏骤停（一只猪因股动脉导管钝性主动脉损伤而死于CPB末期）。晚上在空腹中肌注氯胺酮（10毫克/千克）以镇静。放置气管导管后，用呼吸麻醉机（异氟醚0.5-1.0％）使动物麻醉。右股动脉和静脉插管用于22G导管和5F双腔中央静脉导管。通过穿刺监测动脉压和中心静脉压。将动物肝素化（300 U/Kg）后，将一条16F股动脉导管和18F股静脉套管插入右颈总动脉和颈内静脉。建立体外循环。麻醉动物并切换至完全通风支持。将PaCO2维持在35-40 mmHg，并保持*小的通风。吸氧浓度（FiO2）保持尽可能低，以使脉搏血氧饱和度读数保持在95％以上。

　　出血：动物从股静脉出血，以及出血（平均动脉压（MAP）迅速下降至30 mmHg）和模拟撕裂伤。血液收集在袋子中并自动注入。所有动物在30分钟内保持低灌注水平，损失了1000-1500 ml血液。

　　体外循环（CPB），诱导深层体温循环：离心泵，热交换器，ECMO包装形成了便携式的心肺支持系统（PCSS），以保护整个身体。整个系统提供600毫升的器官保存液（ OPS）。使用两种类型的OPS（普通钾和高钾）。使用股动脉导管和1.4 L高钾OPS，3-4 L/min进行完全心肺旁路手术可导致短暂性心脏骤停。热交换器的温度可以尽快降低。当核心体温达到20°C时，用2L血液代替2L正常OPS。当核心温度达到15°C时，流程将停止并且动画将暂停。血液通过重力从静脉导管中排出，并收集在自动输血袋中。大约90或120分钟后，将流速增加至3-4升/分钟，并调节动脉回流温度以达到预期的再加热速度（0.5°C /分钟）。随着核心温度的升高，所有收集的血液逐渐恢复，以适应增加的氧气需求。还可以根据需要纠正电解质和酸碱异常。心肌细胞的自发活动通常可通过高钾血症和体温过低的逆转来恢复。在短暂的稳定期后，动物逐渐离开体外循环，并用硫酸鱼精蛋白逆转肝素。当动物正常呼吸时，缝合所有切口并移开套管。静脉注射氟比洛芬酯以减轻疼痛，围手术期给予抗生素头孢呋辛钠24小时。除CA时间差异外，所有动物均一视同仁。在实验之前，使用3只动物发展实验方法的细节。

　　实验室测量和神经功能测试：抽取血液来测量肝酶（ALT，AST），肾功能（肌酐）和心肌损伤的标志物。总体表现类别（OPC指数）用于评估术后7天的神经系统状况（1 =正常，2 =轻度残疾，3 =中度残疾，4 =严重残疾） ，5 =死亡或脑死亡）。血液动力学和生理参数：股静脉导管出血可导致动物MAP迅速下降。动物仍然深感震惊。向右颈动脉中注入制冷剂可能会导致自主心脏停止，但没有近似的固有心脏输出。实验结束时，两组动物的心输出量恢复到基线水平。高钾血症和体温过低的逆转恢复了自发活动。接受心脏复律或降压药的两组之间没有差异。低剂量肾上腺素（静脉注射0.5 mg，*大剂量2 mg）可用于低血压和心动过缓。 ca90C组的乳酸和血糖水平低于ca120非体外循环旁路点。这可能是由于CA较长所致。两组的冷却和加热速率相同。存活和神经系统：在ca90组中，所有实验动物在手术后存活72小时。只有一个显示出右腿麻痹，可能是由于右股动脉结扎。在ca120组中，只有两名幸存者表现出后肢截瘫。手术后48小时，三只约120头猪死于呼吸衰竭。两只猪在手术过程中死亡，没有自发的神经活动或反射。 ca90组的所有动物手术后7天的OPC评分为1、OPC评分为2、在ca120组中，只有2个恢复到OPC4、其他5个被分类为OPC5（P\u003c0.05）。术后检查：在ca90组中，术后生化异常（ALT，AST，Cr，LDH，TNT）是短暂的。异常包括肝转氨酶，肌酐水平，乳酸脱氢酶和术后*天TNT升高。 7天后，这些水平降至正常或接近正常。 ca120组无显着差异。术后第1天，ca120组的生化指标均高于ca90组。

　　结论：90分钟的诱导CA（15°C）比120分钟更安全。结果表明，在15°C下120分钟CA是危险的，可能导致高死亡率和严重的神经系统并发症。需要进一步的实验以确定在低于15°C的温度下能否安全恢复120分钟的CA。