动物实验,高血压 中国实验动物信息网 2020-09-03 693

　　背景：高血压是怀孕期间*常见的医学问题之一、影响6-8％的孕妇。许多患有高血压的孕妇都是健康的婴儿，并不是一个严重的问题，但是高血压会增加产妇和围产期的风险。例如，母亲患有先兆子痫，这可能会影响胎盘和孕妇的肾脏，肝脏和大脑，从而导致胎儿并发症，例如体重过轻和早产。在*严重的情况下，先兆子痫会发展为惊厥和危及生命的疾病。但是，孕妇的药物治疗会引起各种发育毒性。一些降低血压的药物在怀孕期间被认为是安全的。但是，通常在怀孕期间避免使用某些*有效的降压药，例如血管紧张素转换酶（ACE）抑制剂和血管紧张素受体阻滞剂（ARB）。例如，氯沙坦已被FDA指定为妊娠D类。这意味着，根据副作用数据，有确凿的证据表明它会影响人类胎儿的发育。与ACE抑制剂和ARB相关的胎儿毒性与胎儿发育过程中血管紧张素II降低和肾素-血管紧张素系统功能障碍有关。 ACE抑制剂可引起胎儿毒性，包括严重的肾衰竭，新生儿无尿，颅骨骨化，胎儿发育迟缓，死产和功能异常。子宫内接触药物可证明胎儿或新生儿毒性，肾功能衰竭，并且使用ARB可能导致胎儿体重减轻，肾脏损害甚至胎儿死亡。显示。除了药物本身的毒性作用外，药物的分布特征还与胎儿和新生儿安全性直接相关。该药物在胎儿和母乳中的大量分布是导致胎儿和新生儿毒性的关键因素之一、而分布不良会导致毒性降低。胎盘迁移和乳汁排泄是ARB的标志。 FMS在胎儿或母乳中的分布尚不清楚，这是评估FMS在妊娠和母乳喂养中安全性的关键。这项研究检测了怀孕和哺乳期大鼠的胎盘转移和泌乳。静脉输注后，我们评估了FMS在胎盘，羊水，胎儿和牛奶中的药代动力学。

　　方法：动物试验：雌性SD大鼠（8-10周大，体重250-330g），光/暗循环动物设施12小时，温度23±3℃，相对湿度55±15％，空气10/h更换20次。每个笼子里有3只动物。 FMS母胎转移：在妊娠（GD）16-17天时，胎儿大小足以进行分析，腹膜内注射舒泰50（20 mg/kg）以麻醉雌性大鼠和聚乙烯管。静脉和股动脉嵌入颈部。恢复后一天，将FMS溶解在盐水中，并通过颈静脉以2.70和5.50 mg/kg的剂量分别以0.17和0.34 mg/h/kg的速率注射，目标浓度为100和200g/ml。已达到通过分别将目标稳态浓度（CSS）乘以分布的稳态量和FMS清除率来确定初始IV推注负荷和连续IV输注速率。无需麻醉即可给药。在手术前和手术后4、8、24、28和32小时从股动脉收集血液。在每次采样时，收集约0.3 ml的血液，并与等体积的肝素化盐水（50 IU/ml）混合。以13000g离心5分钟，并储存在-20°C下直至血浆样品分析。开始静脉内输注药物后三十二小时，通过静脉注射舒泰（2 mg/kg）麻醉动物，并通过颈脱位处死。处死每个组织的三个样品，例如胎盘，羊水和胎儿。加入生理盐水后，用匀浆器将胎盘和胎儿匀浆。样品储存在-20°C直至分析。 24-32hdeFMS的平均浓度代表稳态血浆浓度。通过将稳态血浆FMS浓度除以32小时的平均组织FMS浓度来计算组织-血浆分配系数（KP）。泌乳期FMS：泌乳中期，哺乳期（LD）第12至13天，在麻醉下向雌性大鼠的颈内静脉和股动脉注射舒泰50（20mg/kg）聚乙烯管。恢复后一天，将FMS溶解在盐水中，并以2.70和5.50 mg/kg的剂量通过颈静脉注射，剂量分别为0.17和0.34 mg/h/kg，目标浓度为100和200g/ml。已达到剂量不禁食。在给药前以及在4、8、24、28和32小时收集血液样品。连续静脉输注32小时后，在轻度麻醉下静脉注射舒泰50,2mg/kg，获得牛奶。母乳取样前30分钟，皮下注射5 IU催产素，以利于收集乳汁。用手轻轻拉动乳头，以刺激产奶并将牛奶收集在聚丙烯管中。样品储存在-20°C直至分析。 24-32hdeFMS的平均浓度代表稳态血浆浓度。牛奶KP计算为高于血浆FMS浓度32小时的牛奶浓度。液相色谱质谱联用确定FMS浓度：通过先前报道的LC-MS/MS方法确定生物样品中FMS的浓度。将200μL乙腈和50μL内标溶液添加到50μl解冻的生物样品中，并涡旋1分钟。将混合的样品在4℃下以15000G离心10分钟，将上清液转移至聚丙烯管中，并用等量的蒸馏水稀释。将10 uL液体注入LC-MS/MS。

　　结果：液相色谱-质谱联用FMS：血浆，胎盘，羊水，胎儿和牛奶基质的检出限为0.5g/ml。血浆的正确答案率是94.2-117.9％，胎盘正确率是89.2-1111％，羊水是87.7-116.9％，胎儿是89-110.7％，牛奶是88.8-109.5％。血浆，胎盘，羊水，胎儿和牛奶样品的准确性分别为8、12.3、3.8、10.4和8.5％。 FMS的胎盘转移：在妊娠大鼠血浆中FMS的稳态浓度（CSS）为100g/ml和200g/ml时，血浆和组织中FMS的平均浓度会随时间变化。 CSS的预测间隔为10％和90％，主要是因为已清除FMS。 CSS的10％和90％预测间隔分别为81.4和138.6g/ml，目标是100g/ml（静脉输注，速率= 0.17 mg/h/kg）和162.8和277.3g/ml，目标是200g/ml（静脉滴注，速率= 0.34 mg/h/kg）。施用FMS后，血浆FMS浓度迅速增加，达到114.1±22.0和213±89.4g/ml。它们分别在24小时时接近预期的目标CSS = 100和200g/ml。 FMS浓度在24、28和32小时后没有显着差异，表明FMS浓度达到稳定状态。给药后32小时，胎盘，羊水，胎儿和血浆中的FMS浓度。 CSS = 200g/ml的目标剂量组的胎盘FMS浓度为112.2±51.2g/g，而CSS = 100g/ml的第7组的胎盘FMS浓度为4.9±24.5g/g。我证明了。 CSS = 200g/ml和CSS = 100g/ml剂量组的羊水FMS质量浓度分别为3.3±3和2.3±1.3g/ml，胎儿FMS质量浓度为37.4±23.6 vs 19.2±4.8。做到了。毫微克/克。 CSS = 200g/ml和CSS = 100g/ml组之间的组织浓度没有统计学上的显着差异。表2总结了从组织到血浆的平均分配系数（KP）。胎盘与血浆之间的分配系数（KP，胎盘）为44.6-59％，羊水和胎儿的KP值分别低至1.3-1.7％和14.9-17％。高剂量组和低剂量组中所有组织的KP值具有可比性。这表明随着血浆浓度的增加，被测组织的浓度成比例地增加，而FMS的胎盘转移对剂量不敏感。哺乳期的LMS FMS：分娩后13-14天的目标稳态浓度（CSS）为100和200g/ml。使用FMS，血浆和牛奶中FMS的平均浓度会随时间变化。 Css的预测间隔为10-90％，血浆FMS浓度迅速增加，接近100和200g/ml的目标CSS，并在整个研究过程中保持不变。在每个采样时间血浆FMS浓度均无统计学差异。给药后32小时，100和200g/ml组的血浆浓度分别为126.4±49.3和198.8±40.8g/ml。血浆和牛奶中FMS的浓度以剂量依赖性方式显着增加。 CSS = 200ng/ml组的血浆和牛奶FMS浓度明显高于CSS = 100ng/ml组。计算的血浆和血浆分配系数（KP）为10.4-15.2％。比较剂量组之间的牛奶和血浆分布系数（100对200g/ml）表明，随着血浆浓度的增加，牛奶中的浓度成比例地增加，而泌乳不受剂量的影响。被显示。

　　结论：这是胎儿和新生儿FMS暴露的首次报道。我们的数据表明，FMS转移至胎儿和母乳的比率相对低于其他ARB。需要进一步的研究来评估FMS转移到胎儿和母乳中的临床影响，并揭示FMS在胎儿或母乳中的潜在机制。