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动物实验
中国实验动物信息网
2020-07-16
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大家在做动物实验的时候，常常会出现模型不稳定，结果混乱，或者数据个体差异过大的问题，我根据我做过的一些实验试着总结一些经验，比较适合刚接触动物实验的战友们，对于动物实验的高手们，还请多多指教，并希望能跟帖也说说自己的经验
多数战友有的是做毕业课题时需要做动物实验，有的是以动物实验为业。以毕业课题为主的同学很多没有接触过动物实验，基础也相对薄弱，对于这部分同学可以先找找以前的帖子，看看别人的讨论，多看看文献，理清思路，但是我们也会发现文献中很多没有细节，别人的经验也不一定全部适合自己，所以只有多做预实验，多思考才能更好的完成一项动物实验，我从以下几个方面谈谈我的看法：
1.动物性别、体重选择：
*常用的是大小鼠，兔子这些，犬和猴在一些评价机构会经常用到。大小鼠已经取消了普通级，只有清洁级及更高级别。对于动物选择的性别，*好以雌雄各半为好，因为雌性小鼠受自身激素影响，有可能会得到不一样的结果。国外不是很承认昆明小鼠，所以想发外文的*好不要使用昆明鼠。因昆明小鼠为杂交系，免疫力相对强大，所以做免疫低下类似的模型时应避免选择昆明鼠，以bablc较好，在用药物造模的模型中，有时候昆明鼠所用的剂量也要高于其他鼠。热板实验应选雄鼠，促排卵应选雌鼠等等，大家多看看文献基本不会错；大鼠常用SD及Wistar，两者相差并不是很大。
小鼠的体重以18-22g为好，小鼠体重太大，往往结果不是很好，差异比较大，特别是急性毒性试验，体重不可太大，体重波动范围也不可太大，这个指导原则有写的。对于裸鼠的有些试验，如果实验周期比较长，*好选择3、4w的鼠，因为裸鼠后期很容易因衰老而死，这个有过比较惨痛的教训。大鼠以180-220g为常规选择，不论大鼠小鼠，我个人建议不要给太多的粮食，长的太胖，虽然一般都是要求的自由饮食，原因一个是比较浪费（很多都被磨牙损耗了），一个是增加给药量（灌胃体积需根据给药量调整，下面会说），另外一个，根据经验，有些试验数据不是很好。以上说的都是比较常规的只是，当然有些特殊的实验选择的鼠种及体重因试验而已，比如毛发生长的实验，国内外选择比较多的是C57、C3H这种，而毛发是有生长周期的，你就要去查动物的毛发生长周期，比如C3H在7-8周的时候毛发在休止期，比较合适进行药物研究，比如如果研究性功能方面的，小鼠在8w才真正的性成熟，所以要选择8w左右的鼠，当然，具体问题要具体分析，这里只是说，鼠种、重量的选择是成功的*步。
2.给药剂量、给药体积、给药方式、给药时间：
阳性药的给药剂量一般是根据人的换算而来，或者直接参考的文献，关于给药剂量论坛讨论很多了，但是FDA有个指导原则已经把人与小鼠的换算系数改为12.3了，而且国内有的书上以人的体重70kg为准，有的以60kg为准，个人觉得60kg较为合理。幼鼠的剂量换算和成年鼠不同，不能按照一样的换算方式。如果是全新的药物，应该做个毒理，根据急性毒性的结果来设计三个梯度进行实验，一般是以2或3倍的梯度进行设计。有的同学没有做毒理，只做了细胞，细胞的剂量是不能够推算至动物身上的，如果真的没有足够的精力和药物做毒理，可以去找结构类似的化合物的给药剂量作为参考，西药的剂量与中药的剂量不是一个数量级的，如果你设计动物的给药剂量太大，就会被人质疑成药性的问题及研究意义的问题，比如有的新化合物推算到人体身上后，每天要吃几公斤，显然这样的研究是没有意义的，就算动物身上有效果也会被质疑。有的中药提取物设计的剂量又太小，比阳性药（化药）的剂量还小，那么显然很难做出了结果。有的虽然剂量合理，但是和同类型的阳性药相比，剂量又过大，那么别人就会质疑你化合物的优势在哪里（一般情况下，剂量越大，毒副作用越大），如果药效不能明显好于阳性药，那么你的化合物劣势就很明显了。顺便说下阳性药吧，阳性药要和你研究的药物有可比性，比如如果你的是中药提取物，那么肯定要设计一个中药上市的对照药，而且应该选结构相近，作用途径相似的，以增加可比性。
给药剂量确定后要算给药体积，给药体积不可太大或太小，比如尾静脉注射注射0.05mL，就有点小了，如果不经意露出一些、残留一些，剂量就很不准，再比如大鼠灌胃，每天灌胃10mL，就太大了，容易灌胃后流出来，如果分上下午灌胃两次，又不符合伦理的，所以还是要算出*佳的给药体积，增加药物浓度。
关于给药方式，*好和临床给药方式接近，如果实在没办法进行尾静脉注射，可以选择腹腔注射代替。另外混悬液是不能进行腹腔注射的，混悬液在灌胃的时候也要每灌几只摇匀一下，但是*好还是能配成溶液，比如加入CMC-Na，DMSO，超声、加热等，如果是油溶液可以溶解，那么对照组就要选择灌胃油溶液，如果受试药物有的是用油溶解的，用的是生理盐水，那么对照组可选择只用油溶液，长期灌胃给予油溶液会对生化指标造成影响，所以对照组是一定要设置的，有时候给油溶液的动物血清都是白色的，说明影响还是很大的。不论灌胃、腹腔、静脉给药，练好技术都是*基本的，灌胃灌的不好，容易造成动物死亡，或者食道受伤，那么以后再灌胃就很困难了，如果腹腔注射的不好，打到肝脏或者膀胱里，药物的效果就不能正常发挥，这些技术也有很多战友讨论过，就不再累赘。另外，正常对照组一定也要给药，比如有的对照组是给生理盐水，为了省事就每次都不给生理盐水，结果取材时候发现，对照组体重要重很多，你无法判断模型组体重的下降是因为灌胃导致的还是药物导致的，从而衍生很多无法解释的问题，所以还是要规范操作，统一操作。
给药时间：*好每天固定，激素类药物的评价要去结合动物的激素释放规律，降血糖、血压类药物更是要选择合适的时间给药。在给药时间里面有着比较重要的一次给药，就是末次给药，下面就重点讲讲这个。
3.随机分组、末次给药、平行试验
首先说随机分组，多数试验是以体重随机分组，但有些也已生化指标分组，比如血糖、血压，那么就要先测一遍指标，再分组，白鼠可以用***涂抹，黑鼠可以减耳、耳标等方法，推荐用耳标，不容易出错（但做耳部试验就不可用耳标，比如二甲苯致耳肿胀实验这种）。如果是先造模的，要根据模型情况分组，比如糖尿病的实验，如果是手术造模，没有具体指标，可以做个评分，以评分分组。末次给药对于降血压、降血糖这类型的实验非常重要，而对于长期给药，辅助治疗的，中药类的不是很重要，以降血压为例，你做的这个药物的*佳降压时间是多少，如果是5h，而你给药后1h就测血压了，显然是不合理的，就算是长期给药，*后一次给药也非常重要，这里又牵扯到平行试验的问题，这个我认为是很多实验成败的关键，一定要列出一个时间点，不让实验者知道组别，用流水号操作，避免心理作用的影响，取材的人也要固定，取心脏的只取心脏，取肺脏的只取肺脏等等。平行试验会让实验数据的质量大大提高，在降血压、降尿酸、降血糖类似的实验中尤为重要，有空再详细说说，也希望有经验的战友提出自己的看法。
以上是比较基本的做动物实验的流程，某种程度上可以提高模型及数据的稳定，后面还有取材、测指标、处理数据等，有时间再分享出来和大家讨论。文中多为自己个人看法，有不当之处还请专业人士指出，一起讨论，共同进步。