背景简介：

　　慢性阻塞性肺疾病(COPD） 严重威胁着人类的健康，COPD 的主要特征是不完全可逆性的气流受限，星进行性发展;气道蛋塑是影响 COPD发生、发展及转日的蛋要因茶。气道重塑主要是因为气管、支气管黏膜下成纤维细胞、平滑肌细胞过度增殖所致。

　　原代分离制备流程：

　　一、贴壁法分离

　　1、处死大鼠，无菌条件下开胸，将切除的大鼠气道组织标本立即投入含无菌双抗的 PBS 液中。

　　2、在无菌工作台里对组织标本反复用含双抗的 PBS 冲洗4-6 遍。

　　3、无菌手术刀刮去气道周围组织和气道内膜，用消毒好的眼科剪将组织块剪成2 mm ×2 mm 大小。

　　4、将剪好的组织块贴到培养瓶中，将培养瓶翻转置于37℃ CO 2 培养箱中3-5h。

　　5、待其完全贴壁后在培养瓶中加入5-6ml 含双抗的20%胎牛血清 DMEM培养基培养。

　　二、消化法分离

　　1、处死大鼠，无菌条件下开胸，将切除的大鼠气道组织标本立即投入含无菌双抗的 PBS 液中。

　　2、在无菌工作台里对组织标本反复用含双抗的 PBS 冲洗4-6 遍。

　　3、无菌手术刀刮去气道周围组织和气道内膜，用消毒好的眼科剪将气道组织剪碎。

　　4、用PBS清洗1-3遍，自然沉降

　　5、加入适宜浓度的胰蛋白酶在37℃消化10-30min，期间每隔4-6min中吹打一次。

　　6、终止消化，过筛，离心1500rpm，2-4min。

　　7、将沉淀用含双抗的胎牛血清 DMEM培养基培养。

　　结果展示