背景简介

　　大鼠成骨细胞分离自颅骨组织，成骨细胞是骨形成的主要功能细胞，负责骨基质的合成、分泌和矿化。骨不断地进行着重建，骨重建过程包括破骨细胞贴附在旧骨区域，分泌酸性物质溶解矿物质，分泌蛋白酶消化骨基质，形成骨吸收陷窝；其后，成骨细胞移行至被吸收部位，分泌骨基质，骨基质矿化而形成新骨；破骨与成骨过程的平衡是维持正常骨量的关键。成骨细胞培养不仅有助于了解骨形成机制、骨骼系统疾病的分子和细胞学基础，也是药物筛选、生物材料开发和生物工程研究的重要手段。

　　原代分离制备流程

　　取出生24 h内SD大鼠乳鼠, 浸泡于75%酒精中2～3 min，在超净工作台中, 断头，平皿内取颅骨（取材区域见图2）, 仔细刮除表面附着的软组织, 剔除骨缝之间软骨，先用75%乙醇浸泡10-20s再用含双抗（5-10%）的D-PBS洗涤1-3次, 至骨块发白透亮, 置于另一无菌平皿中；用适宜浓度的 I型胶原酶覆盖骨块, 消化15-30m in, 吸弃上清及消化掉的细胞, 用眼科手术剪将骨块剪碎至1 mm3甚至更小，自然沉降，得沉降的组织；

　　向得到的颅骨组织中加入0.3% I型胶原酶15-25min/次，3-6次，终止消化，用100um细胞筛过滤得滤液；

　　1000rpm，4-6min（此处不建议过高转速，过高转速会使得消化的细小碎片带入细胞，影响细胞生长），得细胞，用完全培养基重悬细胞，铺板，培养。

　　培养基推荐使用：DMEM/F12 + 20% FBS + 1% 谷氨酰胺 + 1% 双抗。