动物造模,药效评价,SARS感染 z-bio 2024-08-21 174

　　(1)复制方法  年龄为3～6岁的健康恒河猴和食蟹猴，按0.15ml/kg体重的剂量经肌肉注射速眠新麻醉，然后经鼻内和气管内感染SARS- CoV BJ01株(10的5.7次方TCID50/ml)。模型动物在攻毒后第2、5、7日的咽拭子均分离出病毒，经免疫荧光鉴定为SARS病毒。部分感染猴的肺部有出血点或出血斑。所有感染猴均可出现不同严重程度的多灶性单核细胞性间质性肺炎，表现为肺泡间隔增宽、出血、渗出，肺泡腔内有脱落的肺泡上皮细胞和巨噬细胞，小支气管和细支气管也有上皮细胞脱落；部分肺泡间隔出现少量以淋巴细胞为主的炎症细胞浸润，肺泡腔内偶见透明膜形成。免疫组化可在肺泡巨噬细胞和Ⅰ型上皮细胞中检测到SARS病毒抗原。感染动物尸检中，在支气管淋巴结和心肌中均能检测到病毒RNA，并有炎症改变。多数模型动物出现多灶性淋巴细胞性感染为主的肝炎，并伴有个别肝细胞坏死。

　　(2)模型特点  模型动物感染后出现病理学的改变，肺脏是病毒感染的主要靶器官，各肺叶均可见弥漫性肺泡损伤，形成透明膜，出现单核细胞浸润。通过病毒学检测及免疫学方法可从模型动物血、咽拭子、肺泡上皮细胞和支气管淋巴结等组织样品中检测到SARS病毒RNA，说明病毒能在非灵长类动物体内复制；并且有机体体液和细胞免疫应答。部分感染猴的白细胞和血小板数量从感染第3日起出现一过性的降低，然后逐渐恢复到正常的水平；动物体内产生SARS病毒的专一性抗体，感染后第2、3、4周的血清抗 SARS-CoV特异性抗体水平均较高。由此可见，恒河猴可作为SARS病毒感染的动物模型，适用于SARS发病机制、药物筛选、疫苗评价的研究。

　　(3)比较医学  所有感染猴均未观察到如高热、干咳、昏睡、一过性的皮疹和呼吸困难等SARS典型临床症状，有2/3的恒河猴出现一过性的低热；而所有食蟹猴的体温均在正常的范围内波动。但感染猴的肺组织病理变化，如弥漫性肺泡损伤、单核细胞浸润等均与人类感染SARS冠状病毒后的肺组织病变基本类似，且病理变化较人类轻。感染后模型动物体内可产生SARS专一性抗体，感染4周左右时其血清中的抗体水平较高，这与人类SARS患者相同；SARS患者体内产生的特异性IgM抗体，从7d开始出现至第11日可达到高峰；而IgG抗体则于10d后产生，至20d达到高峰；同时从感染猴的组织和分泌物中分离到病毒。总之，恒河猴感染SARS病毒的病理学改变与人类感染SARS病毒后出现的病理改变十分相似，且非人灵长动物具有与人相似的遗传背景，所以可成为较为理想的SARS动物模型。但受到客观条件的限制，猴无法在大规模的研究中使用，这种限制降低了本模型的应用价值。