动物造模,药效评价,慢性视神经损伤 z-bio 2024-08-07 109

　　1.造模材料  动物：成年健康家猫，雌雄不限，体重2.5～3.5kg；药物：麻醉剂；器械：实验用球囊。

　　2.造模方法  手术仿人翼点入路。3％戊巴比妥，1ml/kg腹腔注射麻醉动物后，侧卧位，四肢固定，头偏向一侧，建立静脉输液通道，100ml生理盐水中加入40万U青霉素静滴。术区备皮，聚维酮碘消毒，取外眦至耳屏间连线为手术切口，长约3cm，切开头皮，腱膜，钝性分离肌肉，剥离骨膜，磨钻磨除颅骨，扩大骨窗成2cm×2cm大小。手术显微镜下星形切开硬脑膜至骨缘，排除脑脊液，慢慢抬起颞叶脑组织，沿蝶骨棘深入直至见到白色视神经和视交叉。在视神经外侧间隙植入不可脱球囊，后接导管长约20cm，穿皮下隧道引至颈背部，注入造影剂0.1ml，检查球囊位于视神经视交叉及其下的颅底骨性结构之间，导管末端加热封闭，检查无泄漏后将导管埋于颈背部皮下。术后注意观察生命体征和神经系统功能缺损情况。正常组：不进行任何手术处理；假手术组：进行开颅手术，放入球囊而不充盈。

　　3.造模原理  采用球囊植入法造成慢性视神经损伤，建立视神经慢性压迫损伤模型。

　　4.造模后的变化  术后动物能正常存活，无发热、感染、癫痫和肢体运动障碍。CT扫描显示球囊位置正常，无泄漏。

　　正常组和假手术组F-VEPI波、Ⅱ波潜伏期，Ⅰ～Ⅱ峰峰值比较恒定，其余部分波形在个体间变异比较大。猫视神经慢性受压后4周，F-VEP开始出现明显异常，表现为波形低阔扁平，潜伏期Ⅰ、Ⅱ延长，Ⅰ～Ⅱ峰峰值降低，并随受压时间的延长异常更为明显。

　　5.造模后病理及生化变化  正常组Dil逆行标记的视网膜神经节细胞的平均密度为(465±38)个/mm，中央区密度高于周边区。视神经受压后前4周RGC数量无明显改变，至受压后8周RGC数量有显著下降，平均密度为(293±32)个/mm，下降约37％。

　　光镜下检查，视网膜HE染色：正常成年猫视网膜HE染色可见三层细胞核，各层间界限较为清楚，从玻璃体腔向巩膜依次为神经节细胞层、双极细胞层和感光细胞层。节细胞从核形态学上可明确分成两类细胞：一类为大核细胞，染色较浅，核内有时可见核仁；另一类细胞核较小，染色深。视神经慢性受压后4周时视网膜变化仍不明显，受压后8周可见RGC核明显稀疏，大而染色浅的细胞核基本消失，视网膜总厚度变薄，胶质细胞增生。

　　视神经丽春红2R-亮绿染色：正常视神经髓鞘呈粉红色，轴索、神经束膜和神经内膜呈绿色；变性的髓鞘因磷脂消失故不着色。正常视神经髓鞘排列整齐致密，受压后4周见粉红色条索扭曲，局部染色缺失，受压后8周局部染色缺失加重。

　　电镜下检查：①视网膜：正常猫RGC核呈卵圆形，核大，核质均匀，有时可见核仁或核膜内陷，细胞质占细胞比例小，但细胞器丰富。受压后前2周无明显政变，受压后4周和8周可见RGC细胞质成分疏松，内质网扩张，线粒体肿胀，质膜下出现空泡，核膜皱缩内陷，染色质边聚，细胞质空化。②视神经：正常猫视神经髓鞘结构完整，各髓板清晰，排列紧密，轴膜完整，微丝微管均匀地分布于轴浆中。受压后2周仅见轻微脱髓鞘现象，细胞骨架排列轻度紊乱。受压后4周出现板层分离，髓鞘泡状解离，轴突出现空泡样，微丝微管排列紊乱，轴浆内线粒体肿胀，嵴间隙增宽，嵴模糊不清。8周可见髓鞘明显变薄，并可见再生的髓鞘。

　　6.注意事项  实验前检查动物双眼屈光间质清，瞳孔等大等圆，对光反应好，眼底无异常。为了保证手术顺利成功，术后动物正常存活，应注意按无菌原则操作，及时补液，术中给予抗生素预防感染。避免对视神经、视交叉及其供应血管的误损伤。分次注入造影剂使球囊逐渐增大，以尽量模拟慢性视神经损伤的临床病理过程。充盈造影剂时要缓慢注入，术后必须定期CT扫描，保证球囊位置正常，无造影剂泄漏。