动物造模 中国实验动物信息网 2022-12-08 593

　　目的 建立一种硫辛酸合成酶基因低表达的基因修饰小鼠,并检测其抗氧化能力。

　　方法 将硫辛酸合成酶基因 3'-UTR 区域 Loxp 小鼠与 E2a-Cre 小鼠杂交,从子代小鼠中鉴定出LiasL/ +小鼠并进一步繁殖、鉴定因型。 选取基因型为 LiasL/ L和 Lias+ / +的 8 周龄雄性小鼠各 10 只;称重、麻醉后经股动脉采血,然后分离小鼠肺、肾 及肝,并称重。 应用 Western Blot、免疫组化方法检测肺、肾、肝组织中硫辛酸合成酶(LIAS)蛋白的表达水平;分离血清,检测总抗氧化能力(TAC);对肾、肝、肺匀浆后提取总蛋白,检测其 SOD、CAT 酶活性及 MDA 含量。

　　结果 Western Blot及免疫组化分析显示,除小鼠肝 LIAS 免疫组化分析结果外,LiasL/ L组小鼠较 Lias+ / +组小鼠肾、肝及肺组织中 LIAS 蛋白表达水平均显著降低(P < 0. 05)。 与 Lias+ / +组小鼠相比,LiasL/ L组小鼠血清 TAC 水平显著降低(P < 0. 05),LiasL/ L小鼠肾、肝、肺脏器中 SOD、CAT 酶活性显著降低,MDA 水平显著升高(P < 0. 05)。

　　结论 本研究鉴定了硫辛酸合成酶基因低表达的基因修饰小鼠,其在肾、肝及肺中表达较野生型小鼠均降低,并导致相应脏器的氧化损伤。