动物造模,敲除EMCN小鼠模型 中国实验动物信息网 2023-09-27 888

　　目的 建立内皮细胞条件性敲除EMCN基因小鼠模型,探讨C57BL/6小鼠与内皮细胞条件性敲除EMCN小鼠模型体内肿瘤肺转移存在的差异。

　　方法 将内皮细胞特异性 Tek-CreERT2 小鼠与 EMCNflox / flox小鼠杂交,将子代雄性 EMCNflox / wt / Tek-CreERT2+与雌性 EMCNflox / flox小鼠交配,取得内皮细胞特异性敲除 EMCN 基因小鼠 (EMCNflox / flox / Tek-CreERT2+ ,EMCNecko)。 通过在 DNA 和蛋白水平验证基因敲除准确性及效率,提取小鼠基因组 DNA 后,PCR 扩增检测 Tek-CreERT2 及 FLOX 位点,Tamoxifen 诱导后,Western Blot 检测组织中 EMCN 蛋白的表达。 对正常 C57BL/ 6 小鼠与 EMCNecko小鼠表型进行观察及脏器 HE 染色。 为了证实 EMCN 敲除对肿瘤转移的影响,将 LLC 细胞尾静脉注射 C57BL/ 6 与 EMCNecko小鼠,2 周后解剖取肺检测肺转移情况,并对 2 组小鼠的肺转移结果统计对比分析。 将 LLC 细胞皮下注射 C57BL/ 6 与 EMCNecko小鼠,2 周后手术切除皮下肿瘤,分别在术后 2、3 周观察肺转移情况,将两组肺组织进行 HE 染色,并对两组小鼠的肺转移结果统计对比分析。

　　结果 从 DNA 和蛋白水平证实 EMCNflox / flox / Tek-creERT2+小鼠成功构建。 小鼠组织 HE 切片分析显示基因敲除小鼠脏器发育无异常。 尾静脉注射 LLC 及皮下注射 LLC 后切除肿瘤的 C57BL/ 6 和 EMCNecko小鼠均可以发生肺转移,与 C57BL/ 6 小鼠相比,内皮细胞 EMCN 的缺失显著促进了小鼠肺转移。

　　结论 成功获得内皮细胞 EMCN 条件性敲除小鼠,内皮细胞 EMCN 敲除小鼠肿瘤肺转移的能力显著优于正常 C57BL/ 6 小鼠,预期为肿瘤肺转移动物模型各项研究提供快速发生肺转移的动物模型。