动物实验 中国实验动物信息网 2020-08-21 968

　　目的：利用RNA干扰技术抑制自噬调节基因Beclin1的表达，并检测Beclin1表达对裸鼠皮肤成纤维细胞增殖和凋亡的影响以及p53、BAX和Bcl2等基因的作用。

　　方法：在饥饿，H2O2刺激等条件下检测裸沙土鼠成纤维细胞中的Beclin1表达，然后使用设计的Beclin1基因干扰RNA和阴性对照瞬时动员沙土沙棘成纤维细胞转染。使用实时PCR和Western印迹检测沉默效果，然后使用CCK-1实验检测细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞凋亡和Western印迹然后，检测相关基因蛋白的表达水平。

　　结果：饥饿和H2O2刺激均可引起Beclin1表达水平的变化。基因表达转染试剂对裸鼠痣皮肤成纤维细胞的转染效率达到90％以上。实时荧光定量PCR和蛋白质印迹的结果表明，设计的Beclin1 siRNA可以有效降低Beclin1的表达。 Beclin1基因沉默后，裸鼠成皮小鼠皮肤成纤维细胞的生长抑制率显着高于对照组，细胞的早期和晚期凋亡率显着提高。同时，p53、BAX，Bcl2、LC3B，p-AKT和mTOR等价物的表达降低。

　　结论：Beclin1的表达在抵抗H2O2刺激的海星和痣鼠成纤维细胞过程中显着改变。同时，抑制Beclin1表达可抑制裸mole鼠大鼠大鼠细胞的生长，从而促进细胞凋亡。这表明Beclin1基因影响裸鼠。 le鼠在自噬，增殖和凋亡中起调节作用。