目的:建立一种快速,灵敏,特异的TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法,用于胆汁幽门螺杆菌的定量检测。
方法:PCR扩增H. bilis保守基因P17序列,全长ORF435bp,TA克隆,构建质粒标准pMD-HBP17。通过对pMD-HBP17标准品进行定量分析,优化了反应系统,以检测TaqMan探针用于实时荧光定量PCR的灵敏度,特异性和可重复性。通过建立的qPCR方法检测了77个临床样品,并与常规PCR进行了比较。比较测试结果。
结果:建立的qPCR检测方法显示出良好的线性和108至101个拷贝之间的质粒DNA浓度之间的相关性。所得标准曲线的斜率为-3.46、相关系数为0.999,检测灵敏度为20。副本中77个临床样品的检出率为14.3%,高于正常PCR的检出率(7.8%)。
结论:所建立的H.bilis qPCR检测方法具有高度特异性,灵敏性,稳定性,可用于定量和定性检测幽门螺杆菌。