转基因 中国实验动物信息网 2020-08-13 1106

　　报告基因经常用于开发报告基因的转基因小鼠或转基因小鼠模型的过程中。常用的报告基因包括lacZ，EGFP，zsGreen，EYFP，DsRed（DsRed2），mRFP，mCherry，HuCD2、Thy1.1、HAtag，FLAGtag，荧光素酶。

　　从事老鼠胚胎发育的研究人员通常更喜欢使用LacZ。也就是说，LacZ在启动子的控制之下。 LacZ可用于胚胎的全身染色，提供体内基因表达谱的完整图片。为了追踪诸如免疫细胞和神经细胞之类的细胞，通常使用荧光蛋白。这种方法可以轻松分离细胞（例如FACS）和进行体外分析，另一种方法可以轻松跟踪体内分离的细胞（例如过继转移）。早期，*常使用EGFP和EYFP。可能有必要将两只不同的报告基因小鼠配对在一起，以研究这两种基因之间的关系。目前，可以用不同的荧光蛋白标记两个基因，即创建两个不同的模型小鼠。 ..由于大多数人在早期使用EGFP，因此有可能创建其他荧光蛋白报告基因小鼠与先前开发的EGFP小鼠结合。 zsGreen，EGFP和EYFP均为绿色荧光。

　　EGFP和EYFP难以区分。 zsGreen是一种相对稳定的绿色荧光蛋白。 DsRed和TdTomato均为红色荧光。这两种荧光蛋白均已在报告基因模型小鼠中发表。 TdTomato是一种荧光蛋白，具有非常强的信号，现在已经报道了报告基因小鼠，对细胞/小鼠无明显毒性。我相信，越来越多的小鼠将TdTomato用作报告基因。 mRFP和mCherry是两个非常好的荧光蛋白，但是它们需要584m的激发光，因此普通的FACS仪器无法检测到信号，因此需要LSRII之类的仪器。 EBFP和ECFP也用于细胞实验，但很少用于小鼠。例如，激发需要紫外线。如果要在小鼠中表达两种荧光蛋白，*好同时使用两种单独的蛋白，例如EGFP和EYFP。 HuCD2和Thy1.1是细胞表面受体。 HuCD2已失去信号功能，因为已删除了C项序列。何时使用这两个分子？例如，如果您想研究细胞内蛋白质基因（例如转录因子）的功能，则需要分离并纯化表达该蛋白质的细胞。此时，将HuCD2或Thy1.1报告基因置于细胞内蛋白质基因的启动子下（例如，添加IRES-Thy1.1），以确保所有表达该细胞内蛋白质的细胞都在细胞表面。可以表达Thy1.1、这样，抗Thy1.1抗体可用于分离该细胞群以用于进一步研究。当然，抗Thy1.1抗体也可以用于组织切片的免疫荧光检测。

　　HA，FLAG，生物素等是细胞和生物化学实验中常用的标签肽或蛋白质。由于其高度特异性的HA和Flag抗体，它通常用于Western印迹，免疫沉淀和其他实验。生物素可以直接与生物素（抗生蛋白链菌素）结合，并用于免疫沉淀。在模型小鼠中，这些标签肽或蛋白质可以是与目的蛋白质融合的蛋白质。这种鼠标模型*常用于尖端芯片实验中。例如，要研究转录因子的功能，需要知道转录因子在细胞中与染色体基因组DNA结合的位置和结合序列（在正常或刺激条件下）。我们知道，很难获得和制备具有优异特异性和高亲和力的转录因子抗体。此时，可以将标签多肽（例如FLAG）置于转录因子的C端，以创建融合蛋白。刺激细胞后，将细胞化学交联以破坏细胞和基因组DNA，然后使用抗FLAG抗体进行免疫沉淀以沉淀转录因子。*后，我们分析了结合这些转录因子的DNA片段序列，找到了基因组上的转录因子识别序列，并找到了转录因子基因。荧光素酶通常是用于体内成像实验的报告基因模型小鼠。例如，将荧光素酶基因置于细胞因子启动子下。小鼠免疫后，一些细胞或器官表达细胞因子和荧光素酶。可以通过注入荧光素酶底物来检测小鼠体内的荧光分布，从而在不同的免疫条件下导致细胞因子的表达。萤光素酶也经常用于癌症研究。体内荧光成像使您可以研究肿瘤细胞的发育和转移。

　　报告有很多基因。这是一个简短的介绍。对于不同的实验目的，不同的小鼠模型可以具有非常不同的设计。