动物实验,非手术胚胎移植技术 中国实验动物信息网 2020-08-13 1002

　　小鼠是发育生物学和生殖生物学研究中的重要模型动物，其胚胎移植技术是体外受精，嵌合体，转基因，克隆和胚胎冷冻种子库研究的重要环节。我们现在已经成功建立了一种小鼠非手术胚胎移植技术，该技术将用于将3.5天的胚泡转移到2.5天的假孕小鼠的子宫中。平均而言，73％的胚泡可以长成活的新生儿。该技术优于手术。胚胎移植方法简便快捷，只需数十秒即可完成手术过程，节省成本，不需要手术，不易感染，无痛苦，实验动物福利原则适用于子宫药物治疗和其他大型动物和人类胚胎移植研究。

　　实验步骤如下。

　　1、胚胎的制备：在60微米的培养皿中滴入50微升M2液滴，并在每个液滴组中放置5-10个囊胚。吸出两个胚胎：将导管连接到2.5微升的移液器上，调节至1.0微升；半压移液器上的按钮；

　　2、将导管的尖端插入M2滴深处，并在解剖显微镜下观察胚胎。吸气（如果成功），从M2液滴中移出管道，并确保吸收的液体不超过3毫米。轻拍试管以在尖端形成1mm的气泡。如果没有气泡出现，您可以将移液器缓慢调节至1.1微升。

　　3、受体的制备：麻醉的接受注射0.4-0.5 mL，1.25％Avertin（0.2 mL/10 g体重）的母鼠，固定，用食指和拇指握住鼠脊等。按下三个手指并向上倾斜以打开肩cap骨，使用肩cap骨打开外阴，打开冷光纤，并观察子宫颈开口。

　　4、植入物：将包含胚胎的导管发送到子宫颈。弧线位于鼠标的背面。当导管的底部到达开口管的一半时，轻轻按下移液管并缓慢旋转，在底部，将所有胚胎插入子宫，缓慢拉出移液管，然后半按抽屉。移开手指，*后在显微镜下检查导管，看是否有胚胎进入。