透射电镜 中国实验动物信息网 2020-08-13 781

　　主要试剂

　　戊二醛（由EMS进口，仅用于电子显微镜）PFAPBS或PBbuffer1-4％四氧化os缓冲液0.5％铀酰乙酸乙醇乙醇环氧丙烷树脂

　　主要设备通风柜电子显微镜

　　实验程序

　　1.准备材料和溶液事先修复并准备必要的设备，将其在4℃的冰箱中预冷。气管和眼科镜片要么用生理盐水快速冲洗，要么分开，然后直接置于4°C的冷藏2.5％戊二醛固定剂中（保质期为1个月）。存放在C型冰箱中。通常应在2分钟内完成。进行手术切除时，请事先准备两个锋利的刀片（例如剃须刀或手术刀）和一个蜡盘，将固定剂滴在蜡盘上，然后用解剖刀将切开的器官细切。将固定剂阻塞并放置在蜡板上，并使用双刀片锯切方法和固定剂（请咨询我们的办公室工作人员）将组织的尺寸调整为约1立方毫米或约1平方毫米使用长条，剪刀和包含固定液的EP管（*好将1立方毫米的小块缓慢地塞入2 ml的圆底EP管中），为1 ml移液器吸头开一个小开口。使它完全浸入固定部分中）液体可提供足够的固定性。对其进行标记，将其置于4℃，1小时后更换固定剂，将其置于4℃并保存1周。

　　2.第二次固色：PB *洗10次5次，用1％四氧化固定1小时；

　　3、染色：ddH2O *洗5次10分钟，用铀染色2小时；

　　4.脱水：30％乙醇50％乙醇70％乙醇（4°C过夜）90％乙醇一次，持续15分钟，然后100％乙醇10min * 2次，环氧丙烷10min * 2次；

　　5.浸入：1份树脂/ 1份溶剂（ddh2o）3份树脂/ 1份溶剂，2小时通宵的100％树脂，放置2小时或更长时间，或在室温下放置过夜；

　　6、植入：为加快树脂的固化速度，将35ul催化剂DMP-30加入2ml树脂中，首先将该树脂浸入DMP-30中约2小时，然后包埋。用包埋板包埋，在包埋板的每个小孔中添加含催化剂的树脂，用牙签取出一小块纸巾，将其放在小孔的一端，然后取出另一块并放置*后，每个都是并行创建的。然后，将嵌入板放入60°C的烤箱中48小时或更长时间以固化嵌入块。

　　注意事项

　　1.收集材料时的注意事项：用电子显微镜制备生物样品的关键是所制备的样品如实地反映生命状态，例如“验尸变更”和人工变更。有必要避免人工伪像的产生。一步很重要。获得材料的要求是： 1）低温：用于获得材料的设备和固定剂必须在4°C的冰箱中预先冷却。 2）高速：取材时，移动要快并且所用的刀片必须锋利。通常，应在分离器官并在2.5％的戊二醛固定剂中储存在4％的冰箱中后1-2分钟内取走该材料。此外，应避免对组织施加压力和人为损坏。 3）小：应将组织切成*小的碎片以完全固定组织。通常，薄纸片应为约1立方毫米或横截面为1平方毫米的长条，并且长度通常不超过3mm。皮肤，肌腱和其他组织应致密，材料应在1立方毫米以内。 4）准确性：由于电子显微镜的标本需要一小块材料，因此为了电子显微镜的精度，材料的位置需要准确，并且不同实验组的标本应尽可能具有相同的位置。必须位于（来自心肌组织的左心室，左心室等）。否则，它将无法比较，并且会影响观察结果，*终导致电子显微镜检查失败。 5）根据组织的不同，可能需要使用不同的固定剂，例如气管使用2.5％戊二醛，2％PFA，眼睛使用2.5％戊二醛。

　　2.为避免干燥，请勿在脱水，浸入或清洁过程中从液体中取出组织。渗透酸具有剧毒，需要在吃水深度中进行操作铀是放射性的，铀必须存在于吃水深度中，并且必须集中控制处理过程中使用的碎屑。