动物模型,帕金森病 中国实验动物信息网 2020-08-13 1001

　　为了模拟人类PD，理想的动物模型应具有以下特征。

　　（1）出生时多巴胺能神经元的数量和形状是正常的，减少了50％或更多，青少年逐渐开始选择性地减少，并且容易通过神经化学反应。和神经生理学方法；

　　（2）该模型应能够轻松检测其运动功能的损害（包括PD的主要症状，例如延迟，肌肉僵硬和静息性震颤）；

　　（3 ）模型应该能够显示路易体；

　　（4）如果模型是遗传的，则应该基于单个突变，这将导致突变模型具有很强的转移能力。

　　（5）模型应具有相对较短的疾病周期（例如，数月），以使药物筛查经济，直接。

　　在日本，一般有两种国内使用方法：①将6-羟基多巴胺（6-OHDA）注入大鼠的黑质或内侧前脑②模型动物（猴子，小鼠，猪）等等）通过口服管饲和立体定向注射的1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTR）。前者是一种较经典的模型制备方法，其在中国发展较早，但其存在（1）神经元损伤出现较早。它与临床PD患者的黑质中多巴胺能神经元的进行性死亡有关。差异（2）由于很难掌握短距离的损坏程度，因此使用这种方法获取部分损坏的模型的成功率非常低，并且中国的MPTP强制饲喂远低于以前的方法。并且使用了立体定向注射方法。 MPTR用于制备帕金森氏病的动物模型，已在国外用于在猴子和小鼠中建立理想的PD模型。皮下注射，静脉内注射，腹膜内注射和肌内注射通常用于制备，这是可靠且可重复的。然而，这是非常危险的，并且对测试人员和测试条件有严格的要求。

　　1.模型小鼠的制备

　　1968年，Ungenstdet首次报道了使用6-多巴胺（6-OHDA）引起大鼠帕金森氏病的动物模型。这种动物旋转模型的某些特征类似于人类小偷金盏花。*近，人们根据注射部位和6-OHDA的剂量，创建了模仿帕金森氏病各个阶段的动物模型。

　　注射6-OHDA以制备帕金森氏病大鼠：

　　1）在实验中，选择36只体重250-300g的健康Wistar大鼠以制备帕金森氏病的大鼠模型。

　　2）腹膜内注射麻醉的大鼠巴比妥（48mg/kg）

　　3）解剖学操作将麻醉的大鼠头部固定在江湾I-C立体定位仪上。切开，剥离骨膜，停止出血。参考George's Atlas，并使用牙钻在颅骨顶部钻一个孔。定位坐标是平行于耳棒的切牙，在前烟囱后3mm，侧向开口3.0mm，在颅骨表面上9.0mm，并在右NS区域（在套管上）插入一个自制的同心套管。外径为0.7mm，内管的外径为0.4mm，内管距离外管的前端1.5mm，并用粘合剂502和自固化牙托粉固定。以1μg/ min的速度抽吸4μL的6-OHDA溶液（含9.0μg6）-OHDA和8.8μg的抗坏血酸，静置4分钟以排干并缝合皮肤。

　　4、帕金森氏病的21个主要日子是指弗朗索瓦实验方法，包括慢速运动测试，抓握测试，尾部僵硬测试和震颤测试，以记录紧张症状的变化记录下来。记录EMG更改，以识别大鼠模型是否成功。判断标准如下。

　　（1）缓慢移动实验持续35分钟（2）抓地力实验持续55分钟，尾部僵硬实验持续30分钟（3）震颤频率为48次/分钟或以上，EMG组放电位置频率为这是4-8次/秒。使用

　　2,6-OHDA

　　制备侧向PD大鼠模型1）雄性Sprague-Dawley大鼠，体重230-250g

　　2）用戊巴比妥钠（30mg/kg）麻醉实验动物，固定的立体定位设备（江湾IC型）。

　　3）参照大鼠大脑的立体定位图，两个目标点a：前reg尾侧5.0 mm，中线右侧1.9 mm，硬脑膜腹侧7.4 mm，b点：前reg尾侧5.3 mm，中线右侧2.5 mm，硬脑膜腹侧6.5 mm）。将12μg的6-OHDA（Sigma）立体定位注射到右黑质的两个目标点a和b中（注射量为6μg/点，浓度为2μg/μl，0.1％抗坏血酸溶于含盐溶液）。进样速度为0.3μl/ min。注射针头15分钟。  4）在行为检测模型建立后三周，将大鼠用0.25mg/kg的阿扑吗啡（APO）向左旋转（完整侧）。我记录了30分钟内的转数，并选择了210转。 30分钟（7转/分钟）以上的动物是成功的PD模型

　　1-甲基-4-苯基-1,2,3,6使用四氢吡啶

　　3准备PD动物模型，用戊巴比妥（40 mg/kg）腹腔麻醉恒河猴PD模型恒河猴，在颈部皮肤上切开一个切口，并用钝器解剖暴露一条颈总动脉。将动物注射到颈总动脉中。即，将新制备的MPTP（Sigma）以1.0至1.5mg/kg体重溶于2mL生理盐水中，并沿血流方向缓慢注入血管中。如果动物在*次手术后没有明显的PD症状，则每5天注射2至4针，直到出现PD症状。 MPTP建立的灵长类动物的双侧和半侧PD模型在症状，物理证据，病理，生化和对药物治疗的反应方面与人类PD非常相似，并且大多数被认为是代表性的PD动物模型。

　　4、MPTP用于创建帕金森氏病的小鼠模型。小鼠对

　　MPTP的敏感性随种系和年龄而变化。通常，选择体重为25-30 g的10-12周大的成年C57BL褐家鼠，并以30-40 mg/kg的体重经腹膜内注射MPTP，共7天。第6至7次注射后，出现暂时性（2-3小时）躯干休克，垂直发，尾巴过度伸展，运动减少以及攀爬测试受损。

　　5.使用MPTP创建金盏花病小国模型时的注意事项

　　C57BL小鼠对MPTP*敏感，但CF-W小鼠，FVB/N小鼠，Balb/C小鼠与对MPTP敏感的C57BL小鼠相比，CF-1和CD-1对MPTP的敏感性*差。目前，*常用的小鼠是C57BL/6小鼠。b）小鼠年龄对MPTP敏感性的影响老年小鼠比年轻小鼠对MFTP的敏感性更高。这种敏感性上的差异不仅可以在顺式治疗中得到反映。在年长的小鼠中，黑质中的多巴胺能神经元的数量明显减少，而蓝斑中的肾上腺素能神经元的数量减少。然而，在治疗后的老小鼠中也观察到更典型的帕金森氏病行为。学习变化

　　6.帕金森氏病小鼠模型行为变化的定量观察

　　1）爬杆试验

　　2）悬浮实验

　　3）游泳实验

　　上述定量观察方法是帕金森病小鼠模型行为研究提供了一种更准确和客观的方式来提高实验的总体客观性。

　　7.建立模型的其他方法

　　1）利血平模型在多巴胺（DA）和其他囊泡中是保守的，主要是因为它抑制了去甲肾上腺素能神经元的终末再摄取功能。我会。儿茶酚胺递质的耗竭。将固定剂量的利血平注入Wistar大鼠（体重280-300g）的腹腔中可能会导致钝性僵硬和运动症状，例如震颤，屈曲和缺乏运动。神经化学分析表明，大鼠纹状体中DA和其他单胺递质的含量明显降低。因此。这种类型的模型在某种程度上模拟了PD的临床表现和神经化学变化。但是，有明显的缺点。首先，由药物注射引起的运动障碍在不同时间和个体之间变化很大。第二、释放血液血液可同时释放多个递质，不会引起与PD相同的病理变化。因此，该模型的应用仅限于研究药物对肌肉僵硬的影响的实验，很少使用其他运动症状的研究。

　　2）1991年雄性SD大鼠Benshature（250-300g）向黑质注入3周的Fe3 +模型Fe3 +可能引起运动行为的明显改变，从而短期僵硬症状和自发的关节测试旋转运动表现为在新环境中自愿运动的减少。苯丙胺（AMPH）可以增强这种同时旋转运动。神经化学研究表明，同侧纹状体中DA含量平均降低95％，其代谢产物3,4-二羟基苯基乙酸（DOPAC）和高香草酸（HVA）显着降低。我明白。组织病理学证实，TH免疫染色阳性细胞可显着减少酪氨酸，而胶质细胞则活跃地增殖。

　　3）机械损伤模型的研究表明，内侧前肋道机械损伤（MF可导致黑质DA神经元进行性死亡），已建立的建模方法包括MFB突出和半切口尤其是前者被广泛使用。要建立MFB截肢损伤模型，必须精确固定大鼠立体定位设备，并使用专用的Scouten导线切穿MFC。 Brechne使用这种刀切割雄性CFHB.MFB小鼠（150-180g）在1、2、4、6、10和16周后存活计算存在的DA神经元的数量：发现约有28％的黑质（SN）神经元在10周后一周内死亡，约70％的细胞死亡。平均数量为29％，逆行追踪显示，MFB切除的成功率为92％至99％，显示出以下优点：（1）成功率高（2）黑质DA神经元。表现出进行性死亡并能够模拟PD的病理变化的整个过程，这在神经元再生和PD预防的研究中具有一定的重要性。学位不稳定。