动物实验,胚胎移植 中国实验动物信息网 2020-08-13 917

　　胚胎移植技术是*流行的动物生殖技术之一、因为它是研究和开发各种胚胎生物技术（如克隆，转基因，体外受精和性别鉴定）的必要技术工具。

　　母牛的供体和受体选择

　　提供胚胎的人称为供体，而接受胚胎的人称为受者。

　　（1）供体牛的选择：供体牛的选择原则在制定和应用胚胎移植计划时，您需要仔细选择合适的供体牛，它们应健康，无病且具有较高的繁殖价值。是必须的。生殖功能处于较高水平。考虑到技术和经济方面，我们可以参考以下原则： ①品种丰富。它符合该品种的标准，具有优良的血统，体貌，生产力，早熟和长寿，遗传稳定，血统明确且没有遗传缺陷。 ②健康体质。体质健壮，四肢结实，生殖功能正常，遗传病，感染，难产，流产和生殖系统疾病，或助产率极低。没有明显发情周期，子宫内膜炎或长期空腹的生殖疾病不能用作供体。 ③适当的年龄。适合的年龄为15个月至8岁。 ④播放质量。它具有高生育力，正常的生殖器官和正常的发情周期。婴儿期的发情周期是正常的（或至少以前有2次正常发情），并且在产后60天有2次正常发情的记录（1年良好的观念，良好的怀孕）。受孕率和生殖指数）生小牛。 ⑤排卵表现。牛的生殖器官，特别是卵巢和子宫发达，对超排卵反应良好，排卵频率高，受精卵的质量高。 ⑥气质佳。选择性温顺母牛被用作易于操作的供体。预计要成为捐赠者的母牛必须具有完整的生产记录（交货，挤奶），才能确定其繁殖价值，然后再被选为捐赠者。

　　（2）收件人奶牛的选择：收件人奶牛仅用于妊娠，不需要遗传特征，但发情周期必须正常，生殖器官无病，体型大且健康，便宜且低产的年幼母牛或牛作为接收者。在发情期同时治疗供体牛和受者牛

　　发情周期中牛的生理变化很大，因此供体和受者的生理状况必须保持恒定。否则，移植后的胚胎将无法生存。 ..因此，供体母牛和受者母牛的发情时间应该相同或相似，并且前后不应超过1天。因此，供体和受体应与发情同时处理。

　　体外受精胚胎生产

　　胚胎移植通常使用超排卵来获得良好的胚胎，但是这种方法效率低下且成本高昂。自1980年代以来，发达国家对体外受精胚胎生产技术进行了广泛研究，并取得了划时代的进步。目前，牛胚胎的实验室生产技术已成为许多发达国家的常规技术。改进实验室胚胎生产技术不仅在实际生产中在经济上非常重要，而且不仅可以生产大量廉价的胚胎，而且还是进行理论研究的重要技术工具。克隆动物生产和转基因动物生产等高科技技术必须基于实验室胚胎培养技术。

　　目前，有两种主要的实验室培养牛胚胎的方法。一种是共生系统。将受精卵和粘附的培养的上皮细胞粘附到培养皿上的培养的输卵管上皮细胞，颗粒细胞等上，并培养直到形成可用的胚胎。共培养系统是一种复杂，耗时且费力的胚胎培养方法。另一个是人工合成的输卵管输液（SOF0培养系统，相对而言，操作方法相对简单，并且由于*近的研究和改进，SOF培养系统的培养效果是共培养系统）。达到或超过

　　使用超声波感应法是一种从牛体内收集卵母细胞并通过体外受精产生胚胎的方法。该技术已开始在生产中应用，对于没有因衰老而导致繁殖障碍或超排卵的牛，生鸡蛋采集技术肯定会产生高质量的胚胎。实验室胚胎生产技术是一个复杂的系统工程，其整个过程包括卵母细胞的收集，卵母细胞的成熟培养，精子的受精，精子和卵子的加工，受精和受精。培养方法，胚胎发育和培养方法为了获得理想的实验室胚胎生产效果，有必要提高每个步骤的效率以实现整个过程的*完美结合。指使用灌洗液从供体牛的子宫角洗掉早期胚胎，并通过手术和非手术方法将其收集在特定的血管中。有两种方法，目前通常使用非手术方法：通常在供体母牛发情和交配后的6至7天内收集胚胎。该阶段简单易行，对生殖道造成损害的风险低，收集效果好。正面高，背面低，便于操作和冲洗胚胎，剪去脊（3-4尾椎骨），用酒精，2％普鲁卡因2-3 ml或2％消毒。在硬膜外麻醉的情况下，使用4至2 ml盐酸利多卡因（如4至2％），如果母牛焦虑，则肌内注射2％至4 ml的景松灵。通过检查外阴的大小来估计黄体的数量，清洁外阴，用用于非手术冲洗胚胎的2通和3通冲洗管对部件进行消毒。区别在于冲洗液是注入和排出的，两通类型是相同的管道，三通类型有2个入口和2个出口，其他2种是输卵管。 ，有一个用于注入空气的导管，它可以使子宫角的底部用水清洗时可以固定零件。但是，安全气囊需要适当充气，并且很容易损坏子宫。如果子宫内膜太小，则冲洗管无法固定，从而在子宫中留有间隙，冲洗液会从阴道中流出。通常，必须在37°C下用500 ml卵母细胞冲洗液冲洗子宫角的两侧。鸡蛋液应顺畅地排出，其体积应相同。因此，在手术过程中，可以通过直肠壁手动抬起子宫，以利于输液。收集到的鸡蛋潮应该放在37°C的无菌室内进行检查。现在，用于收集胚胎的卵母细胞冲洗液使用改良的Dulbecco磷酸盐缓冲盐水（mPBS），该溶液可主要用于洗涤胚胎以及胚胎储存和培养基在做。该制备方法简单，成本低廉，更适合。将收集的卵洗液静置10至30分钟，将胚浸没后，吸出上层，并将剩余的沉淀物（约50 ml）倒入多个卵试杯中。将胚胎置于立体显微镜下检出。在检查过程中，必须小心，迅速地保养胚胎，以确保它们不会丢失，并且在30分钟内完成检查，以防止显微镜光源温度升高对胚胎质量的影响。

　　将收集到的胚胎放在高倍镜下观察其形态和发育时期。发育中的胚通常是整齐，透明的卵裂球，相对均匀的大小，均匀而紧密的分布，完整的透明带以及与年龄匹配的发育速率。但是，未受精的胚胎，透明带透明卵裂球和透明带损坏都是无法使用的胚胎。

　　胚胎移植

　　牛胚胎移植方法包括手术移植和非手术移植，目前主要使用非手术移植。一种特殊的胚胎移植装置用于通过阴道和子宫颈将胚胎注射到子宫角的特定部位。操作步骤如下。

　　（1）携带和消毒接受牛：与捐赠牛相同的方法。

　　（2）胚胎清洗和包装：用新鲜的防腐液将识别出的好胚胎清洗2-3次，以去除粘液和粘附的杂质，并且胚胎由0.25 ml塑料制成。封装在细管中。 ..对于封装，首先将保存溶液吸入约5 cm长的细管中，然后在管中形成0.5 cm的空气层，然后将包含保存溶液的胚胎吸入约2.5 cm长。然后形成0.5厘米的空气层。 ，*后将储备溶液吸到试管末端。胚胎装入后，应在显微镜下检查细管，以查看胚胎是否在管内。

　　（3）胚胎移植：将包裹胚胎的细管插入移植装置，其开放端（远离棉芯的一端）朝内。检查直肠内接受奶牛卵巢排卵侧的黄体结构，从直肠抓紧子宫颈，将移植器送到子宫颈，抓紧直肠子宫角，然后连接到黄体侧的子宫角。轻轻推入插管器，该插管器穿过子宫角的大弯头，然后将胚胎推入并缓慢取出注射器。手术过程中，动作应平稳，快速，移植部位要准确，移植后应检查小管中是否缺少胚胎。如果辍学，则需要补植。

　　捐赠者和接受者的术后观察

　　胚胎移植后，请注意捐赠者和接受者的健康状况，以及他们在指定时间内是否发烧。可以在下一个发情期饲养供体母牛，但是如果仍然需要供体，排卵通常需要几个月。对于受体母牛，移植后的发情表明移植失败。胚胎可能会丢失，死亡，被吸收或有缺陷，或者受者母牛的子宫环境可能不合适。如果温度不高，则继续观察3-5、发情期间，应在适当的时间进行妊娠诊断。