动物实验 中国实验动物信息网 2020-08-12 783

　　(一)动物选择  选择健康的日本大耳白兔或新西兰兔，雌雄均可。

　　(二)手术过程  根据不同的部位及损伤血管的方法，所需器材设备以及手术过程有所不同。

　　1．不同部位的手术方法：

　　(1)手术准备

　　1)器械和药品：①兔手术台(附固定用绳索)。②手术刀片(大圆刀)，刀柄，圆头手术剪，眼科剪，眼科镊，牙镊，血管钳，丝线，大角针，针持(以上手术器械均需消毒)。③5％戊巴比妥钠，1％利多卡因，0.9％盐水，普通肝素，5％葡萄糖溶液。

　　2)固定和麻醉：将动物编号称重后，固定于手术台上。经耳缘静脉缓慢推注戊巴比妥(0.5～0.7ml/kg)，注意动物的呼吸，避免发生呼吸抑制。测试角膜反射，角膜反射消失提示麻醉满意。

　　3)备皮、消毒、铺巾：以弯剪剪去手术野的毛，聚维酮碘(碘伏)消毒后铺无菌巾和孔巾，以巾钳固定。

　　(2)手术过程

　　1)颈总动脉(图5-16)：充分暴露颈部，与气管右侧触摸颈总动脉搏动明确后，确定切口位置。分别用牙镊或血管钳向两侧夹起皮肤，用手术剪在两血管钳之间的皮肤上剪一小口，将血管钳伸进切口，贴紧并挑起皮肤撑开血管钳以钝性分离皮下组织，然后向上下两侧小心剪开皮肤约3～4cm。钝性分离皮下组织及颈部肌肉并向外侧拉开，即可见在气管右侧纵行的右颈总动脉鞘。在鞘内，颈总动脉与颈静脉、颈迷走神经、降压神经伴行在一起。可先将颈总动脉鞘分离出来，再从鞘内分离出颈总动脉，剔尽周围结缔组织，游离出长2～3cm的颈总动脉，尽可能向远心端游离。根据不同的损伤方法和手术目的进行后续操作。

　　2)股动脉(图5-17)：触摸股动脉搏动*强点，沿股动脉走行，在切口沿线的中点两侧，分别用牙镊或血管钳向两侧夹起皮肤，用手术剪在两血管钳之间的皮肤上剪一小口，将血管钳伸进切口，贴紧并挑起皮肤撑开血管钳以钝性分离皮下组织，然后小心剪开皮肤约2cm。以血管钳和手指经肌肉间隙钝性分离至股动脉，可见股静脉走行于其内下方。选择无分支的血管段，仔细分离血管周围的疏松结缔组织，使血管充分游离。根据不同的损伤方法和手术目的进行后续操作。

　　2．损伤方法  空气干燥法、电损伤法一般应用于股动脉和颈总动脉，球囊拉伤法、过度扩张法一般应用髂动脉。

　　空气干燥法、电损伤法以及球囊拉伤法(合并或不合并应用高脂饲料)实质上制作的是动脉粥样硬化的动物模型，术后一定时间对已发生狭窄的血管进行各种介入治疗[球囊扩张和(或)支架置入]制作再狭窄模型(两步法)，其中球囊拉伤法应用得*为广泛。

　　过度扩张法则在正常血管通过过度扩张(球囊或支架)损伤动脉内膜和中膜制作再狭窄模型(一步法)。

　　(1)球囊拉伤法：其原理应用充盈的球囊在血管内皮表面摩擦导致内皮剥脱损伤，以高脂饲料辅助，导致动脉损伤修复过程中形成富含脂质的斑块。

　　设备和器械：血管造影机，0.014英寸指引钢丝，(2.0～2.5)×(15～20)mm球囊导管，5FJR造影导管，压力泵，三联三通，Y型接头，泛影葡胺

　　1)动脉粥样硬化模型：手术部位为股动脉。应用上述方法充分游离股动脉。在充分游离的股动脉穿过双丝线，结扎远心端。助手提拉近心端丝线，拉起动脉的同时可阻断动脉血流。术者用眼科镊提起股动脉，用眼科剪在远心端结扎线的近心侧0.3cm处的动脉壁上剪一45°斜切口，切口约为管径的一半。

　　将球囊连接压力泵，抽负压，将2.5mm×20mm球囊导管尖端插入动脉切口后，助手松开拉起的近心端丝线，继续插入球囊导管约10cm，以3～5atm扩张球囊后回拉球囊造成内皮损伤。反复3次后拔出导管，结扎动脉。逐层缝合。

　　2)再狭窄模型：手术部位为颈总动脉。应用上述方法充分游离右侧颈总动脉。在充分游离的颈总动脉穿过双丝线，结扎远心端。

　　助手提拉近心端丝线，拉起动脉的同时可阻断动脉血流。术者用眼科镊提起股动脉，用眼科剪在远心端结扎线的近心侧0.3cm处的动脉壁上剪一45°斜切口，切口约为管径的一半。迅速插入5FJR造影导管(0.014英寸指引钢丝尖端露出导管尖端约1mm)后，助手松开拉起的近心端丝线，继续前送指引钢丝和导管通过结扎线部位后，再次拉紧丝线。

　　在0.014英寸指引钢丝引导下通过主动脉弓及胸主动脉将造影导管送至腹主动脉，行双下肢动脉造影。注入肝素120U/kg。

　　撤出造影导管，根据参考血管直径及病变长度选择适合型号的球囊和(或)支架，对狭窄超过50％的病变以适当的压力(一般4～5atm，30秒/次×3)进行扩张，记录进行扩张的是哪一侧、病变狭窄程度、病变长度、扩张压力以及所用器械的型号。

　　重复造影，确保残余狭窄不超过20％，如置入支架则确保支架贴壁良好。

　　撤出导丝和导管，结扎动脉，逐层缝合伤口。

　　(2)电刺激法：原理为局部电刺激导致血管内皮损伤，并可伴有血栓形成，辅以高脂饲料导致局部动脉粥样硬化斑块形成。

　　设备和器材：电刺激仪，血管造影机，0.014英寸指引钢丝，(2.0～2.5)mm×(15～20)mm球囊导管，5FJR造影导管，压力泵，三联三通，Y型接头，泛影葡胺

　　1)动脉粥样硬化模型：手术部位为颈总动脉或股动脉。应用前述方法游离颈总动脉或股动脉。

　　将刺激电极垫一自体脂肪组织后放置于血管的近心端，温度电极置于远心端，两电极间隔约1cm，电极钩取血管动作尽量轻柔，表面覆以湿盐水纱布。调整电流为1.2mA，刺激12～15分钟，电损伤程度以局部微变黄而无明显焦痕，局部变细，近心端水肿为宜。以金属夹固定在血管旁，作为标记。逐层缝合伤口。

　　2)再狭窄模型：手术部位：如动脉粥样硬化模型手术部位在颈总动脉，则进一步的血管成形术入路在同侧颈外动脉，如动脉粥样硬化模型在股动脉，则进一步的血管成形术入路应用右侧颈总动脉。手术过程同球囊拉伤法。

　　(3)空气干燥法：原理为应用干燥空气损伤血管内皮，并可导致血栓形成，辅以高脂饲料，局部形成动脉粥样硬化病变。

　　设备和器材：血管造影机，0.014英寸指引钢丝，(2.0～2.5)mm×(15～20)mm球囊导管，5FJR造影导管，压力泵，三联三通，Y型接头，泛影葡胺

　　1)动脉粥样硬化模型：应用前述方法游离颈总动脉或股动脉。在充分游离的动脉下穿过双丝线，距离约1cm。勒紧近心端和远心端的丝线，以27G注射器针头穿刺游离段动脉。经穿刺针头以80ml/min的流量干燥游离血管腔，共10分钟。生理盐水关系游离血管段后，撤除结扎线。以金属夹固定在血管旁，作为标记。缝合手术伤口。

　　2)再狭窄模型：手术部位选择：如动脉粥样硬化模型手术部位在颈总动脉，则进一步的血管成形术入路在同侧颈外动脉，如动脉粥样硬化模型在股动脉，则进一步的血管成形术入路应用右侧颈总动脉。

　　手术过程同球囊拉伤法。

　　(4)过度扩张：原理为局部球囊和(或)支架过度扩张，损伤血管内膜和中膜，局部血管对损伤的过度反应形成再狭窄。

　　设备和器材：血管造影机，0.014英寸指引钢丝，(3.0～3.5)mm×(15～20)mm球囊导管，5FJR造影导管，压力泵，三联三通，Y型接头，泛影葡胺

　　操作过程：应用上述方法充分游离右侧颈总动脉。

　　在充分游离的颈总动脉下穿过双丝线，结扎远心端。

　　助手提拉近心端丝线，拉起动脉的同时可阻断动脉血流。术者用眼科镊提起股动脉，

　　用眼科剪在远心端结扎线的近心侧0.3cm处的动脉壁上剪一45°斜切口，切口约为管径的一半。

　　迅速插入5FJR造影导管(0.014英寸指引钢丝尖端露出导管尖端约1mm)后，助手松开拉起的近心端丝线，继续前送指引钢丝和导管，在0.014英寸指引钢丝引导下通过主动脉弓及胸主动脉将造影导管送至腹主动脉，行双下肢动脉造影。

　　注入肝素120U/kg。

　　撤出造影导管，根据参考血管直径按照1.2～1.5：1的比例选择球囊和(或)支架，送至股动脉以适当的压力(一般8～14atm)进行扩张和(或)释放支架，记录进行扩张的是哪一侧、扩张的压力以及所用器械的型号。

　　重复造影，观察*终结果。撤出导丝和导管，结扎动脉，逐层缝合伤口。

　　(5)手术注意事项

　　1)准备1％利多卡因，可在全身麻醉效果不甚满意的情况下进行局部浸润麻醉，减少动物的挣扎，也可避免过量追加静脉麻醉剂导致动物死亡；另外，在充分游离血管段之后，进行插管操作之前，可以利多卡因局部浸润，对局部血管运动神经的阻断可使血管扩张，便于插管操作。

　　2)兔对失血耐受性差，应通过熟练的手术操作尽量减少失血，如失血较多，可予生理盐水或5％葡萄糖溶液补充血容量。

　　3)导管经主动脉弓至胸主动脉较困难，需要注意指引钢丝尖端的塑形。

　　4)两步法动物模型，在制作动脉粥样硬化模型4周后进行再狭窄模型的制作。

　　(三)术后动物处理及标本取材固定

　　1．术后的处理  术后肌注青霉素80万U/d，连续3天。高脂饲料含胆固醇2％，花生油6％。过度扩张动物模型仅喂食普通饲料。

　　2．固定和取材

　　(1)术后四周进行固定和取材。

　　(2)设备和器材：血管造影机，0.014英寸指引钢丝，5FJR造影导管，泛影葡胺；兔手术台(固定用绳索)；手术刀片(大圆刀)，刀柄，圆头手术剪，眼科剪，平镊，血管钳，丝线，7F动脉鞘管，输液器，标本瓶；5％戊巴比妥钠，0.9％盐水，4％甲醛。

　　(3)操作过程(以髂动脉再狭窄模型为例)：如前述方法麻醉固定动物，分离左侧颈总动脉并插管至腹主动脉分叉前行双侧髂动脉造影，记录影像，以备测量。

　　正中逐层开腹至腹腔，将粗大的结肠推至一侧，钝性分离肠系膜及后腹膜疏松结缔组织至腹主动脉。将脊柱前的腹主动脉及脊柱左侧的腹腔静脉分离清楚，分别游离，后于其下穿过双丝线，均结扎近心端。

　　助手提拉远心端丝线，拉起动脉的同时可阻断血流。术者用平镊提起血管，用眼科剪在血管壁上剪一45°斜切口，切口约为管径的一半。各插入动脉鞘管一根，结扎远心端丝线固定鞘管。

　　将兔手术台移至水槽，腹主动脉鞘管侧管接生理盐水，腹腔静脉鞘管侧管三通打开，灌注瓶(袋)液面高于动物140～150cm，灌注液流速为2.0～2.5ml/min。待静脉流出液变清时换用4％甲醛原位生理压灌注，每只兔共灌注100～200ml灌注液。

　　分离截取目标血管段，放入4％甲醛标本瓶中固定。