动物模型,内耳病 中国实验动物信息网 2020-08-08 829

　　（1）复制方法体重300至400 g的4周大的自交雄性C57BL/6小鼠和豚鼠表现出正常的耳朵反射能力，没有中耳感染。麻醉豚鼠后，对心脏进行灌注，将颞骨断头，剥离所有内耳膜组织，并在无菌的10 mmol/LTris缓冲液中用4 mg的1 mg/L抑肽酶匀浆。离心匀浆，将上清液冷冻在-20℃；沉淀物储存在0.5％月桂基硫酸钠，0.5％β-巯基乙醇，1％甘油，2mmol/L苯基甲基磺酰氟，10mmol/LN中。做到了。将己基马来酰亚胺用50 mmol/LTris缓冲液匀浆，计算蛋白质含量并将其等份保存在-80°C下。用制备的内耳抗原（InnerEarAntigen，IEAg）免疫小鼠，并在每只模型小鼠的颈后皮下注射IEAg完全弗氏佐剂（Comprete Freund佐剂，CFA）乳状液，在多个点上进行50μl减毒活我背部皮内注射百日咳博德特氏菌。 25×1000,000,000（包括细菌），IEAg含量为100μg。免疫后，测试小鼠的双耳听觉脑干反应（ABR）。麻醉后，将动物置于隔音和电屏蔽的房间中，并使用诱发静电计进行测试。 0.1 ms的刺激是一种短促的声音，间隔时间是50 ms，滤波器是100到3000 Hz，扫描时间是10 ms，叠加是500倍。少于30 dB的刺激性白噪声会使侧耳模糊。 Wave II响应阈值用作确定ABR响应阈值的标准。建模后第7、14、21、28天检测到动物血清中的抗IEAg抗体，HE染色后通过光学显微镜观察，收集颞骨组织以制作常规的内耳组织切片。

　　（2）模型特征：用IEAg免疫后2周内，模型动物的体重逐渐降低。免疫3周后，体重恢复到免疫前水平，并可能缓慢增加。动物活动减少，耳朵反射变得不敏感。 ，步态不稳等临床症状。在建模之前，C57BL/6小鼠的平均ABR反应阈值为46dBSPL，左右耳之间无显着差异；动物的ABR反应阈在模型的第7天显着增加。对模型动物的显微组织病理学观察显示，在建模后的前两周，在鼓室鼓膜，耳蜗管，前庭基底和内耳组织耳蜗轴周围的血管中主要存在炎性细胞的浸润，并观察到淋巴积液。看到了很多，螺旋状可见。神经节细胞有肿胀和坏死变化，免疫后细胞数量逐渐减少。用豚鼠IEAg建立该模型后，诱导的细胞浸润仅限于内耳组织，模型动物的听觉变化与细胞浸润程度和血清抗IEAg抗体水平，免疫力和免疫力呈显着正相关。提示体液反应正在诱发自身免疫内耳的疾病（自身免疫内病，AIED）可能起重要作用。

　　（3）比较医学。自身免疫性内耳疾病的病因学在临床上仍是未知的，并且没有特定的实验室检查。治疗原理有争议，治疗效果不理想。建立类似于临床AIED的疾病动物模型将有助于阐明自身免疫性内耳疾病的病因，并分析免疫调节治疗对内耳的影响。先前的研究表明，大多数实验性AIED将近交豚鼠用作实验动物，在体自身抗体通过体液免疫介导的免疫反应诱导的初始全身免疫后，具有多种增强免疫力。有报道称他们将雇用。这些模型的成功率较低（20％-50％），听力障碍的程度较轻（8-25 dB），并且内耳的病理变化并不典型。多个增强器的实验持续时间较长，从而增加了实验的不确定性。结果的影响。由于在可重复性和深入的免疫学研究方面，自交系动物比自交系动物差，因此这些模型无法准确反映人AIED的病因和病理生理变化。该模型使用内耳抗原免疫严重听力损失的动物。免疫过程会增加听力障碍的程度。可以在血清中检测到内耳组织的自身抗体。这些变化与AIED患者的临床表现是一致的。进一步确认特征性自身免疫损伤，例如形态上的血管周围炎症。作为广泛使用的近交小鼠，C57BL/6小鼠在个体之间非常一致，并且对实验显示出相同的响应。这消除了杂合遗传背景对实验结果的影响。 C57BL/6小鼠用于老年痴呆症研究，因为随着年龄的增长，他们可能会出现老年痴呆症的高频率。用这种方法引起的AIED模型具有高发病率，严重的听力损失，内耳的典型病理变化，较短的建模周期，简单的制造方法，相对简单的实验条件和其他因素。它具有易于控制的优点。