动物模型,中耳炎 中国实验动物信息网 2020-08-08 1302

　　1豚鼠分泌性中耳炎（SOM）模型

　　（1）复制方法使用300-420 g豚鼠并正常反射球员，首*行耳镜检查以检查外耳和中耳疾病。分别排除和测试。 0.5、1、2、4kHz 100dB短纯音耳朵反射阈值。腹膜内注射戊巴比妥钠，麻醉剂量为30 mg/kg体重。麻醉后，躺下并固定豚鼠的右耳道。用2％的tin剂和75％的乙醇消毒耳道，并用3 x 108 CFU灭活肺炎，将0.1 ml的链球菌悬浮液通过耳膜的前部和底部以及在注射前注入动物的耳膜中在琼脂上培养，使活菌株生长并预防急性感染。注射细菌悬液后，对模型动物进行耳镜检查，观察2-10天，注意耳膜的颜色变化，并再次确认耳反射阈值。随后，在麻醉后处死动物，取出两侧的听觉囊泡，用甲醛固定并剥去鞘，将切片包埋在石蜡中，用常规HE染色，并用光学显微镜观察。

　　（2）注射细菌悬液后48小时的模型特征鼓膜的鼓膜在血管图案的径向扩张程度上有所不同。在第三天，鼓膜失去正常光泽，并呈现淡黄色，棕红色或琥珀色。在第5-7天的表现*为明显，鼓膜活性降低，并且中耳腔主要呈浆液性，淡色，水样，淡黄色，透明的淡色渗出液。模型动物的纯音响应有所不同，主要是0.5、1、2 kHz。在显微镜下进行的组织病理学观察显示，动物中耳腔中有淋巴细胞为主的炎性细胞浸润，在某些情况下，淋巴细胞，单核细胞，吞噬细胞和嗜酸性粒细胞浸润。粘膜充血和听性囊壁水肿，毛细血管增加，通透性增加和粘膜上皮纤毛脱落。

　　（3）比较医学分泌性中耳炎是上耳科常见的临床疾病，也被称为“顽固性耳病”。它的发病率很高，严重的听力损失，经常引起中耳粘连和鼓室。硬化症和胆固醇肉芽肿等角质瘤甚至可能在个别情况下发生。迄今为止，关于SOM的病因和病因的研究尚未得出令人信服的结论，也没有准确有效的预防措施。近年来，随着分子生物技术的发展，检测水平和培养方法的不断提高，许多研究报告不断检测中耳渗出液中的致病细菌，并证实了中耳渗出液中细菌DNA的存在。我是。因此，中耳腔的感染和炎症是SOM的主要原因，这种观点正在逐渐被接受。细菌学，组织学检查和临床体征的结果表明，SOM可能是中耳的轻度或低毒性细菌感染，细菌降解产物内毒素在SOM的发病机理中起作用。它表明实现。该模型使用灭活的肺炎球菌悬液制备了豚鼠SOM动物模型。操作简单，方法可靠。结果证明了SOM的产生。模型中使用的减毒和灭活肺炎链球菌不会引起急性中耳炎症，是研究中耳黏膜听觉阈值和SOM病理变化的理想动物模型。

　　2小鼠分泌性中耳炎模型

　　（1）复制方法选择耳反射敏感，体重25-30g，年龄6-8周，经耳镜检查确认没有外耳道的BALB/c小鼠。中耳感染。每周给予BALB/c小鼠1.2 mg卵白蛋白（OVA）溶于0.6 ml磷酸盐缓冲盐水（PBS）和5.14 mg氢氧化铝作为免疫佐剂，进行腹膜内注射。我连续两个星期使用过一次。全身性致敏; 2周后，以5 ml/kg体重的剂量，于24小时后腹膜内腹腔注射麻醉的20％尿烷，15μl1μg/ LOVA + PBS混合物，通过前鼓膜和下鼓膜进入鼓膜腔。无菌注射后，在24小时后，再次麻醉小鼠，观察耳膜的状况，重复注射两次以刺激耳朵，以建立分泌性中耳炎模型。眼内注射OVA溶液后，每天对模型动物进行耳镜检查。第二次攻击后两天，处死动物，收获双侧听觉囊泡，定期固定并脱钙，并准备组织病理切片。我们用HE染色光学显微镜观察了鼓膜增生，测量了中耳黏膜的厚度，并计数了嗜酸性粒细胞。通过甲苯胺蓝染色计数细胞，浆细胞和肥大细胞。

　　（2）模型特征模型的耳镜检查结果表明，鼓膜和周围组织在注射后24小时出现红斑，鼓膜在36小时后失去其正常光泽，呈淡黄色或琥珀色这将是。限制，但我们看不到透明液体通过耳膜的水平。大多数模型动物可以在中耳腔中找到淡黄色，澄清，稀薄的液体。在模型动物的中耳中，观察到淡黄色淡水样浆液性渗出液，鼓膜充血，水肿，毛细血管增多，通透性增加，上皮纤毛脱落；镜下病理组织学观察显示炎性细胞浸润，其中嗜酸性粒细胞，浆细胞和淋巴细胞主要浸润在粘膜下特异性骨髓腔中，并且在炎性细胞中观察到肥大细胞和单核细胞。模型动物的听觉囊壁的甲苯胺蓝染色显示蓝色核和品红色肥大细胞主要分布在粘膜下结缔组织的毛细血管周围。模型易于创建，方法可靠。

　　（3）比较医学耳中分泌的中耳炎是耳鼻喉科的常见病，主要发生于儿童，发病率高，病因仍不明，准确有效的防治方法是空无一人。随着免疫学和分子生物学的*新进展，中耳作为独立免疫防御系统的理论已被大多数学者逐渐接受。当前免疫学的观点已经进入耳科学领域，并且体耳不是免疫免疫部位。整个中耳粘膜跟随鼻咽的上呼吸道粘膜，并覆盖耳道，鼓膜，鼓膜腔和乳突腔。作为上呼吸道的衍生物，中耳的粘膜系统也起上呼吸道粘膜的作用。当潜在的免疫系统被病理抗原刺激时，它可以激活粘膜中的各种免疫细胞，引起局部免疫反应。该模型是通过OVA敏化和眼内刺激产生的分泌性中耳炎模型。结果，证实了嗜酸性粒细胞和肥大细胞与I型过敏有关，间接地，I型过敏与SOM有关。在病因学中的作用。以这种方式建立的SOM动物模型为进一步研究SOM与I型过敏之间的相关性提供了一个极好的实验模型。

　　3大鼠化脓性中耳炎（化脓性中耳炎）模型

　　（1）复制方法220-320g雄性SD大鼠的耳朵反射正常，耳膜完整，光锥清晰，透光性好指示速率。听觉脑干诱发电位的阈值为20-30 dB。通过腹膜内注射戊巴比妥钠以35 mg/kg体重的剂量麻醉大鼠。方法1：在手术显微镜下，用75％的乙醇对模型大鼠的外耳道进行消毒，然后将0.05 ml浓度为5×1000000 CFU/ml的肺炎球菌悬液注射到右侧右下鼓膜的下腹部。将向左耳注射0.05ml无菌耳的悬液用作对照。方法（2）：将大鼠头部和颈部的腹侧切开，在两侧拉皮，沿颊肌后的筋膜间隙将颊肌和下颌二头肌的后部分开。可以通过拉动耳朵来放置薄而脆弱的水泡，将耳朵的囊泡放在颈部中线的三个深侧。与①一样，用小针头在左右两侧注入悬浮液。手术后，常规饲养大鼠并随意饮水和饮食。在手术后第7和14天观察模型动物的耳膜后，将它们在甲醛-乙醇心脏中灌注10分钟，然后将头部放在甲醛-乙醇固定剂中1周。取两侧听觉小泡的组织样本，准备常规组织切片和SEM样本，并用光学显微镜和电子显微镜观察。

　　（2）模型特征手术后7d和14d，模型动物的鼓膜明显增厚，肉眼可见黄化脓性变化。在解剖显微镜下观察时，该动物的听觉囊泡在显微镜下充满黄色肿块和组织病理学。科学观察表明，粘膜层明显增厚而未形成粘附；扫描电子显微镜显示粘膜表面层明显增厚而未形成粘附。该模型建立方法简单易实现，结果可靠。

　　（3）比较医学就听觉泡沫解剖学和粘膜结构而言，大鼠与人中耳的鼓膜腔非常相似，是研究中耳疾病的合适实验动物。但是，大鼠的耳道位于耳道的下部腹侧，并且在背部具有许多肌肉结构，因此与豚鼠的耳根进路不同，很难从背部进入头部或背部。以这种方式创建的模型采用了穿过大鼠头部和颈部腹侧的中线方法，其中听觉囊泡在两侧颊肌与二头肌下颌骨的后部之间显示筋膜。容易在空腔中找到。考虑到大鼠听觉囊泡的骨质会影响穿刺，解剖和切片这一事实，因此在开发此模型时，需要称重约250 g的大鼠和听觉囊泡的薄囊泡。您需要选择一个骨骼。近年来，通过临床病理活检，颞骨标本的连续切片的观察和动物实验，各种类型的中耳炎是修复反应过程处于相同阶段和不同阶段的炎症症状，并且各种类型的中耳炎。人们普遍认为可以共存。粘附性中耳炎临床上是一种慢性中耳炎或其后遗症和并发症。它具有很高的临床发病率，是患者听力损失的重要原因。它对人类健康和生活质量，特别是对儿童的健康有重大影响。影响生长发育。但是，粘附性中耳炎的病因仍然是耳科学中的主要临床问题，因为粘附性中耳炎的病因仍是未知的并且其临床疗效差。因此，建立具有粘附性中耳炎的理想中耳动物模型对于理解其病因并提供有效的治疗方法非常重要，该动物模型的建立是具有粘附性中耳炎的中耳动物模型的进一步复制。提供用于动物测试的证据。