动物模型,闭塞性脉管炎 中国实验动物信息网 2020-08-06 974

　　血栓闭塞性脉管炎是以自身免疫为主的周围血管疾病，吸烟、寒冷等外界因素刺激及性激素差异为本病的主要发病原因。下面介绍利用上述致病因素对血栓闭塞性脉管炎动物模型进行复制的方法。

　　(1)复制方法

　　1)免疫提取物加烟草致大鼠闭塞性脉管炎模型(A model of thromboangitis obliterans in rats by tobacoo and immune extract)

　　体重为200～250g，6～8月龄Wistar大鼠。造模前，大鼠先适应环境1周。将大鼠后肢脱毛，在大鼠后肢动脉周围皮下注射来自脉管炎(TAO)患者的免疫提取物，每次0.1ml，皮下注射后形成皮丘，每4天1次。将首次注射 TAO免疫提取物的大鼠置于干燥容器内，用塑胶管将烟草于燃烧罐内缓慢燃烧形成的烟雾导入干燥容器内，每次15min，每天1～2次。再将25％的烟草提取液皮下多点注射于大白鼠后肢动脉周围，1次/d。造模周期共计2个月。造模结束后，采血检测全血和血浆黏度及血沉变化；取大鼠患肢远端中、小动静脉及周围肌肉组织，经10％甲醛固定，石蜡包埋。制作常规组织切片，HE染色，光镜下观察。将大鼠患肢膝关节以下动脉锐性切取5mm左右，并纵行剖开展平，制成5mm2大小。生理盐水仔细冲洗管腔内积血，置放于4℃预冷的2.5％戊二醛固定液内，固定12h后，用0.1mol/L的磷酸缓冲液(pH 7.2)浸洗2h(中间换2～3次新液)，再用1％锇酸二次固定，经双蒸水洗2h(中间换2～3次新液)，用上升梯度浓度乙醇脱水，醋酸异戊酯置换，低真空临界点干燥，IB-5离子溅射仪镀铂，用扫描电镜观察并照像。

　　2)免疫提取物加寒冻致大鼠闭塞性脉管炎模型(A model of thromboangitis obliterans in rats by cold exposure and immune extract)

　　体重为200～250g，6～8月龄Wistar大鼠。造模前，大鼠适应环境1周。将大鼠后肢脱毛，在大鼠后肢动脉周围皮下注射来自脉管炎(TAO)患者的免疫提取物，每次0.1ml，皮下注射后形成皮丘，每4天1次。将经首次注射TAO免疫提取物的大鼠后肢置于0℃冰水混合物中，寒冻时间由15, 20, 30min递增，待各鼠适应此温度后，30min/d，实验共计2个月。病理标本制备和检测指标同免疫提取物加烟草大鼠闭塞性脉管炎模型。

　　3)免疫提取物加性激素致大鼠闭塞性脉管炎模型(A model of thromboangitis obliterans in rats by immune extract and sexial hormone)

　　体重为200～250g，6～8月龄Wistar大鼠。造模前，大鼠先适应环境1周。将大鼠后肢脱毛，在大鼠后肢动脉周围皮下注射来自脉管炎(TAO)患者的免疫提取物，每次0.1ml，皮下注射后形成皮丘，每4天1次。将经首次注射TAO免疫提取物的大鼠肌注丙酸睾丸酮1mg/kg，1次/d，促其与绝育之雌性大白鼠交配，造模过程共计2个月。造模第1周，模型大鼠均未出现明显变化，第2周时模型大鼠肢端皮色潮红，整个造模过程中未见趾端溃脓、坏疽等晚期症状。病理标本制备和检测指标同免疫提取物加烟草大鼠闭塞性脉管炎模型。

　　4)免疫致大鼠闭塞性脉管炎模型(A immune model of thromboangitis obliterans)

　　体重为200～250g，6～8月龄雄性Wistar大鼠。将大鼠后肢脱毛，在大鼠后肢动脉周围皮下注射来自脉管炎(TAO)患者的免疫提取物，每次0.1ml，皮下注射后形成皮丘，每4天1次。将免疫提取物与不全弗氏佐剂混合(1：1)0.1ml，皮下注射于上述大鼠肢体内侧。试验周期、病理标本制备和检测指标同免疫提取物加烟草所致的大鼠闭塞性脉管炎模型。

　　5)烟草加寒冻加性激素加免疫致大鼠闭塞性脉管炎模型(A model of thromboangitis obliterans in rats by tobacoo， cold exposure，sexial hormone and immunity)

　　体重为200～250g，6～8月龄雄性Wistar大鼠。将大鼠后肢脱毛，在大鼠后肢动脉周围皮下注射来自脉管炎(TAO)患者的免疫提取物，每次0.1ml，皮下注射后形成皮丘，每4天1次。然后给予(1)、(2)、(3)、(4)造模方法中各种因素的全部操作，造模过程共计2个月。病理标本制备和检测指标同免疫提取物加烟草大鼠闭塞性脉管炎模型。

　　(2)模型特点  上述5种造模方法中，以烟草加寒冬加性激素加免疫综合模型的成功率*高，病变分期*为明显，周期*短；免疫提取物加性激素造模成功率*低，病变*轻，短期内病变进展分期不明显。免疫提取物加烟草大鼠闭塞性脉管炎模型出现早期TAO炎症症状的成功率较高，而出现晚期症状的成功率低。免疫提取物加寒冻大鼠闭塞性脉管炎模型与单纯注射TAO患者坏死组织浆为抗原来免疫动物的模型相比，方法简单，周期短；但不如免疫提取物加烟草模型大鼠造模时定量准确。

　　(3)比较医学  血栓闭塞性脉管炎是一个以自身免疫为主的周围血管疾病，吸烟、寒冷等外界因素及性激素差异为本病的主要发病原因。上述针对其病因所造的模型动物均出现TAO的相应体征，肉眼见潮红、肿胀，且出现晚期趾端坏疽、趾端溃脓，模型大鼠的双后肢中、小动静脉做病理检查、扫描电镜检查所取的病理标本与确诊的TAO患者截肢所取标本病理改变基本一致。有不同程度的内膜增生，新鲜或肌化血栓，完整、增厚的内弹性膜，不同程度的血管炎症；血液流变学检查也显示了模型大鼠各项指标明显升高，这与临床TAO患者的症状、体征和病理变化相符，与多年临床总结的TAO中医辨证分型也基本一致。用上述5种方法所造成的闭塞性脉管炎模型，雄鼠成功率明显高于雌鼠，这与临床发病率相同。