动物造模 中国实验动物信息网 2023-06-20 1068

　　到目前为止，诱导动物模型已在RA研究中得到*广泛的应用。不仅可以制造啮齿动物，而且可以制造兔子，狗和猴子。诱导剂有很多类型，包括AA，CIA和OIA模型。但是，在病理变化和免疫系统调节异常方面，这些诱导的动物模型与人类临床表现之间存在一定的差距，例如抗核抗体，皮下结节，浆膜炎，RA。没有血管炎。动物模型仅在特定条件下存在。它是通过关注一个或几个因素而建立的。无法完全反映RA的所有特征。

　　（1）佐剂关节炎模型

　　[建模机制]佐剂可引起局部淋巴结发炎并刺激免疫细胞的增殖。用弗氏完全佐剂（CFA）免疫动物可以刺激免疫细胞的增殖，异常增强动物身体的免疫功能，并引起针对关节滑膜的自身免疫反应。免疫复合物沉积在关节腔中。它产生类似于类风湿关节炎的变化。 [建模方法]将液体石蜡和无水羊毛脂以2：1或6：4的比例混合，并在80°C下加入灭活的BCG疫苗（BEG），以制备浓度为10 g/L的BCG乳液，形成完全研磨的油包水乳液。将完全乳化和混合的CFA皮下注射到大鼠后肢的足底，一次单侧注射0.1 ml。注射CFA后，观察大鼠反应，关节肿胀，组织病理学变化以及淋巴细胞亚群的变化。该模型称为AA（佐剂性关节炎）大鼠模型。

　　注：①制备CFA时，用各种研钵将各种成分完全压碎，或反复注射连接在三通管上的两个注射器，充分混合并使用油包水它形成乳液并延迟佐剂的吸收。它可以长时间刺激免疫系统。 ②幼鼠（9个月大）诱发佐剂性关节炎的可能性较小。 

       [模型的特征] AA模型的主要病变主要是局部炎症反应，继发性病变通常在炎症后约10至20天出现，并在约20天达到高峰。炎症在踝关节中*重要，会影响脚垫和整个脚。病理变化包括滑膜下组织发炎，滑膜增生，血管pan形成和软骨破坏； 4周后，关节发红和肿胀减少，骨质减少，新骨形成，关节间隙变窄，关节发生不可逆的变化。

　　【模型的评估和应用】AA模型可用于类风湿关节炎的病因学研究，自身免疫病理学研究以及类风湿关节炎药物的药效学研究。致敏后，

　　AA大鼠模型出现了两个后肢的踝关节明显肿胀，致敏侧的踝关节发炎性肿胀，致敏侧的继发性自身免疫肿胀。但是类风湿关节炎患者与关节肿胀相似。但是，虽然AA大鼠模型显示出明显的T细胞功能障碍，但RA患者通常显示出异常的体液和细胞免疫功能。这是AA大鼠模型与RA患者之间的免疫功能障碍的差异。

　　该模型的方法简单易行，其病理表现与RA相似，但缺乏慢性病理过程，病变具有一定程度的自限性，病理生理上有一定差异。单独的AA大鼠模型具有某些局限性。

　　（2）胶原蛋白诱发的关节炎模型

　　[建模机制]胶原蛋白是一种细胞外基质成分，分为I型，II型和III型。 I型和I型胶原蛋白存在于皮肤和某些器官的间质中，II型胶原蛋白在关节软骨中含量丰富。用异种II型胶原蛋白对动物进行免疫可以引起对关节软骨中II型胶原蛋白的自身免疫反应，从而建立胶原蛋白诱发的关节炎模型。  [建模方法]将异质II型胶原蛋白溶解在0.1mol/L乙酸中制成2g/L溶液，在4℃下搅拌使其完全溶解，然后将其放入4℃的冰箱中过夜。通过混合II型胶原蛋白和CFA并等量乳化（即每毫升1 mg CII和1 m9 BCG疫苗）来制备CII乳液。

　　1、小鼠胶原诱导的关节炎（CIA）模型的制备将0.1ml的每只小鼠的脊部皮内注射乳剂以诱导炎症，并在第20天腹膜内注射0.1ml的乳剂作为挑战注射剂。

　　2、大鼠CIA模型的制备将大鼠的背部剃毛，在4至6个部位皮内注射1 ml乳剂，并在1周后进行加强免疫并注射0.5 ml。免疫诱导后，观察动物反应，关节肿胀，组织病理学变化以及淋巴细胞亚群的变化。

　　[模型的特征]致敏后第24天，小鼠出现关节肿胀，出现了两条后腿发红和肿胀，扩散到前脚和尾巴，变得更严重，并在36天达到*大峰值。做到了。另外，在疾病发展过程中，动物的皮毛失去光泽，失去一些毛发，减轻体重，并伴有耳朵和尾巴的炎症性病变。致敏大鼠7天后，一些大鼠的脚踝皮肤变红，略微肿胀，病理切片显示出轻微的炎症。 14天后，大多数大鼠脚踝关节肿胀，脚踝皮肤发亮且充血。关节活动受限，病理切片显示滑膜组织肥大，肥大，并伴有炎性细胞浸润.21天后，关节肿胀持续增加，部分具有皮肤溃疡和病理切片的大鼠表现出丰富的血管nu形成和关节软骨侵蚀； 5-6周后，病理变化加剧，包括关节软骨和软骨下软骨。骨头被Pannus腐蚀并破坏了。 CIA的免疫学特征是CD4 + T细胞起主要调节作用，体液免疫因子（例如II型抗胶原自身抗体和炎性细胞因子）在病理过程中也起重要作用。  [模型的评估和应用] CIA模型可用于类风湿关节炎的病因学，自身免疫病理学，细胞因子的作用以及类风湿关节炎药物的药效学研究。 CIA的诱导与动物株有关，异种II型胶原在DA，BB，DR和LEW大鼠中显示出较高的诱导率，而在BM或F344大鼠中则不那么敏感。 CIA模型的临床表现是多发性外周关节炎，病理改变主要是增生性滑膜炎，其随后破坏了关节软骨直到骨骼被破坏。单核细胞侵袭滑膜并持续存在，在动物中具有高滴度的IgC和抗自身II型胶原的抗体，表明免疫过程是该疾病的主要原因。

    （三）鸡蛋蛋白诱发的关节炎模型

　　[建模机理]鸡蛋蛋白（白蛋白）是一种异质蛋白，动物用卵蛋白免疫，并且动物的身体引起对卵蛋白的免疫反应。 ..*后，将卵清蛋白注射到关节间隙中，针对卵清蛋白的抗体与卵清蛋白结合以激活补体，从而导致免疫复合物沉积在关节间隙中，持续性滑膜炎和滑膜炎。卵清蛋白诱导的关节炎模型，引起膜增生，血管nu形成和定植。

　　[建模方法]大鼠主要用于建模。将卵蛋白溶解在生理盐水中制成20 g/L的溶液，与等体积的CFA混合，然后将1 ml皮下注射到大鼠的背部进行致敏，每周一次，每次1 ml一次，三个星期。*后一次注射后一周，将5 mg溶解的卵蛋白注射到关节腔中。观察诱导免疫后的大鼠反应，关节肿胀，组织病理学变化以及淋巴细胞亚群的变化。

　　[模型特征]末次注射后24小时内，关节肿胀增厚，表面温度明显升高，病理症状为急性滑膜炎，有大量渗出液。此后，关节肿胀得到缓解，在14到21天达到高原，发生率100％。关节的滑膜增生并形成血管nu。滑膜细胞从第1层增加到第3层，再从第5层增加到10层，其次是单核细胞，巨噬细胞和淋巴细胞，并且CD4 + T淋巴细胞是常见的。在某些动物中，此阶段可能发生软骨的过早破坏。四周后，发生不可逆的关节软骨和骨破坏，软骨细胞坏死，软骨纤维化和新的软骨下骨形成。*后，可能会发生骨骼畸形，并在6个月后留下慢性炎症。  [模型的评估和应用]卵清蛋白诱导的关节炎模型可用于类风湿关节炎的病因学研究，自身免疫病理学，细胞因子作用以及类风湿关节炎药物的药效学研究。 OIA模型的病因主要是由于关节中抗原的持续存在，它刺激滑膜细胞分泌抗体，形成抗原-抗体C3复合体，维持滑膜炎和引起膜增生和血管nu形成。A患者的关节软骨中也发现了免疫球蛋白和C3复合物。这表明卵白蛋白诱发的关节炎模型在病因上与RA有些相似。