动物模型,淋巴瘤 中国实验动物信息网 2020-07-31 1161

　　（1）化学诱导的淋巴瘤动物模型

       [建模机制]*常用的诱导剂是N-甲基亚硝基脲（MNU）。它的致癌机制与O6-甲基鸟嘌呤的形成有关，后者会在DNA复制过程中引起GyA点突变。  

      [模型化方法]单品系或腹膜内注射，静脉内注射，口服或强饲法分剂量可能诱发多品系小鼠胸腺淋巴瘤。当前，*常用的方法是腹膜内注射：使用8 ml 0.01 mol/LPBS（pH = 7.2）DMSO 92 ml作为溶剂，并将MNU与10 mg/ml浓度的诱导溶液混合。并且可以立即使用。使用6-8周的SPFC57BL/6小鼠，雄性和雌性。腹膜内注射MNU诱导溶液（50 mg/kg体重），共2次注射（分别为0和8周）。注射后继续基本饮食，并观察动物体重，饮食，被毛颜色和活性的一般变化。

　　【模型的特征】（1）MNU诱导的小鼠胸腺淋巴瘤的形成过程实际上是单个T淋巴细胞TCR基因的重排，MNU的作用导致恶性转化和单克隆增生，*后替代正常胸腺的细胞是T细胞衍生的肿瘤。 （2）用光学显微镜破坏了胸腺的结构，使中等大小的淋巴样肿瘤细胞扩散。 （3）可以进行腹膜内注射，静脉内注射，口服和管饲法等单次或分次剂量，不同品系的动物可能诱发淋巴瘤，但发生率不同。

　　[模型的评价与应用]该方法简便易行，肿瘤形成的相对周期短，肿瘤形成率高。（1）化学致癌物经常用于药物筛查，因为它们经常诱发多部位肿瘤。从病因学的角度来看，与人体相关的肿瘤相对相似，因此该模型通常用于某些详细研究。 （2）病毒诱导的淋巴瘤动物模型

      [建模机制]爱泼斯坦-巴尔病毒（EBV）是一种基因组长度为172 kb的双链DNA病毒，在病毒颗粒和B淋巴结中含有线性分子。球形细胞的特征是它们通过EBV/c3d受体（CD21）感染B淋巴细胞。一旦进入B淋巴细胞，DNA就被环化并成为B淋巴细胞的附加组件，可以在染色体外复制，从而在细胞中建立隐性感染。它刺激细胞生长和转化，并诱发疾病。

　　[建模方法]

　　1、对于EBV分离，选择将释放转化的EBV颗粒并能够在体外用EBV转化mar猴B淋巴细胞的标准细胞系B95-8细胞。大规模培养后，将细胞置于饥饿疗法中7-10天，并收集培养基。在4°C下以4000/min离心30分钟，将上清液转移到另一个无菌离心管中，在40°C下以12000/min离心120-150分钟，弃去上清液，弃去原始培养液。添加1％的新鲜培养基并重复使用。用移液管离心，并以3000r/min的速度离心20分钟。通过0.22μm一次性过滤器过滤上清液，以获得100x浓缩EBV悬浮液。分配并储存在-80°C以备将来使用。

　　2、分离淋巴细胞，并用健康成年人的新鲜血液接种，并使用EBVIgA快速检测试剂盒检测VCA-IgA抗体滴度。用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞（PBL），在没有小牛血清的PRIM1640培养基中，PBL的体积固定为8×10000000至10×10000000。在无菌条件下，向SCID小鼠腹膜内注射1ml的PBL悬浮液。接种PBL后三天，腹膜内注射0.4 ml EBV悬浮液。

　　3、在模型复制期间，宿主可能会因嫁接与宿主反应而死亡，这会使复制模型不稳定。环孢菌素A（Cyclosporin A）可用于阻断上述反应。如果使用，注入0.9％NaCl稀释至1 mg/ml，然后注入PBL。然后，每只SCID小鼠连续2天腹膜内注射10mg /（kg·d），从第3天开始腹膜内注射15mg /（kg·d），每隔一天总共注射11次。

　　[模型的特征]①属于高恶性非霍奇金淋巴瘤的侵袭性和致死性病毒形成实体淋巴细胞肿瘤。组织病理学观察表明，肿瘤细胞是大裂痕。（1）有些未切割，有些具有免疫原样的形态，有些具有浆细胞分化的特征。 （2）用基因探针和单克隆抗体检测的结果是，诱导的肿瘤是人EB细胞来源的肿瘤，其包含小爱泼斯坦-巴尔病毒核酸分子EBER-1、并且在肿瘤细胞核中观察到爱泼斯坦-巴尔病毒颗粒。

      [模型的评估和应用]正常细胞来源于健康成年人的外周静脉血，并且易于获得样品。由于病毒基因组的结构简单，分子背景清晰，修饰和操作容易，实验周期短（约2个月）。存活的小鼠具有高的肿瘤诱导率，诱导的肿瘤是侵袭性实体瘤，易于观察，并且其组织病理学形态和生长特征是人类恶性肿瘤的生物学特征。和......一致EBV广泛分布在肿瘤细胞中，并且具有单一的癌症诱导因子。可以得到EBV诱导的人类正常细胞肿瘤之间因果关系的直接基础。

　　（III）电离辐射诱发的淋巴瘤动物模型

　　[建模机制]电离辐射可直接引起DNA损伤。促进人类和动物中各种肿瘤的发展。许多研究表明，胸腺是免疫系统的重要组成部分，是放射致癌作用的“靶器官”。辐射诱发的小鼠胸腺淋巴瘤也已成为研究放射致癌作用的经典动物模型之一。否急性或分次照射是胸腺淋巴瘤的高风险因素。

　　[建模方法]雌雄，体重18至22g的近交BALB/c小鼠，使用全身X射线治疗仪，雌性，吸收剂量率为0.287Gy/min，吸收剂量为1.75Gy，每周共4次可以一次成型。该模型的成功期约为6个月。

　　[模型的特征]（1）其原始结构消失并替代肿瘤细胞的肿瘤细胞大，细胞数量少，嗜碱性，并且细胞核多样。另外，内质网丰富的生长和光滑表面上没有细胞质核糖体，可见的病毒颗粒和出芽现象，细胞分化程度低，生长快，生长旺盛与肿瘤细胞有关。 2）肿瘤细胞是可移植的，在相同品系的小鼠中具有侵袭和转移行为。

　　[模型的评估和应用]诱导的肿瘤模型易于操作，具有恒定的靶器官和致癌物，具有较高的诱导肿瘤形成率，并且基本上模拟了肿瘤的发展过程。然而，肿瘤潜伏期的个体差异很大，并且不容易同时获得具有一致病程或肿瘤大小的动物用于实验治疗。