富血小板血浆,种植体周围骨缺损 中国实验动物信息网 2020-11-17 509

　　背景：使用牙种植体已成为现代牙科治疗的一个重要组成部分。建议立即植入新鲜拔牙窝作为减少骨丢失和缩短假体治疗时间的一种手段。然而，残留的骨缺损，种植体颈部和残余骨壁之间，可能引起细胞迁移从结缔组织和上皮组织到缺损区，可防止材料与骨整合。对于这种缺陷，需要增加骨植入术和植入物植入。需要寻找替代骨来减少或避免自体骨移植。几种材料，从其他物种的骨骼结构（异种移植）中综合衍生或加工，已被用来替代自体骨。牛源性异种骨由于来源丰富，易于移植，被广泛用作骨移植材料。它可以提供骨传导支架，其具有与人体骨相当的矿物质含量，使之能与宿主骨结合。这是迄今为止*好的骨替代材料，引导骨再生结合使用。数年来，富血小板血浆（PRP）被认为能促进骨愈合，特别是与PRP混合的骨移植材料已被报道能增强骨形成。PRP与自体骨移植复合可提高成骨率，并能促进骨形成。*近，PRP已成为许多牙科和口腔外科手术的一个有价值的辅助，如消融手术，牙周整形手术，治疗牙周骨缺损，以及有关的种植体植入位置的程序。PRP可以定义为一种自体血浆，其血小板浓度高于基线，它是通过病人自身血液离心而产生的。血小板释放多种伤口愈合的生长因子和细胞因子，如血小板衍生生长因子（PDGF）、转化生长因子β1和β2（TGF-β1和β2）、血管内皮生长因子（VEGF）、血小板衍生的内皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子，血小板活化因子-4. 因此，PRP是生长因子的悬浮物，已被证明能诱导软组织和硬组织的愈合和再生。然而，关于它对骨愈合的生物学效应的报道却自相矛盾。采用自体移植或无PRP在兔颅骨缺损的骨愈合试验中，发现PRP与自体骨的关系并未提高骨愈合过程。也有试验证明，在异体移植物中加入PRP对移植物的新骨形成没有影响。这些结果的不一致导致了PRP对异种骨愈合影响的研究。因此，本实验的目的是评估PRP作为一种辅助剂与牛异种异种骨联合修复兔牙种植体骨缺损的影响。

　　方法：研究中使用24个钛牙种植体，长度8.5毫米和直径3毫米。

　　胶原膜作为屏障膜，用于覆盖整个手术部位。选取5～6个月龄健康雌性新西兰兔12只，体重3.2～3.7公斤，作为动物模型。

　　制备PRP：每兔抽取4毫升自体血液，用23号针头连接到5ml无菌注射器，然后加入到含有柠檬酸钠的管中并混合。血*初于2400 rpm离心10分钟，来分离PRP和贫血小板血浆（PPP）。PRP和PPP又以3600 rpm离心15分钟，从PPP中分离PRP。获得的血小板体积约为0.5毫升，然后进行血小板计数。我们的实验动物，全血及PRP血小板数分别为236×103 /μL和625×103 /μL，使用这种血液系统，PRP中血小板的浓度至少是血小板基线值的2.6倍。在应用前，用10%氯化钙溶液和1KU牛凝血酶激活PRP。活化后，PRP转变为凝胶状物质，与异种移植混合，其比例为0.5毫升PRP和0.5毫克异种移植。

　　外科手术: 所有兔子的手术是在无菌条件下进行，全身麻醉，肌肉注射5mg/kg盐酸甲苯噻嗪和40 mg/kg氯胺酮诱导，并注射相同的混合物半剂量维持麻醉。然后，切口部位剃毛和消毒。1.8ml 2%盐酸利多卡因含1:100000注射肾上腺素作为切口部位局部麻醉减少皮下出血。胫骨表面有长约3厘米的切口，沿胫骨长轴内侧切开。在植入前，在低速连续无菌生理盐水灌溉下在种植区使用6.5~7.0mm使用环锯牙钻通过皮质骨和松质层，创建骨内缺损，深度约为3毫米。钛植入物的长度为8.5毫米，直径3毫米，然后通过缺陷和皮质骨放置，建立一个4毫米的标准化差距。共植入种植体24颗，1个胫骨1个。所有种植体在插入的时候均稳定。采用两种治疗方法治疗骨缺损：（1）异种移植单独作为对照组移植，（2）异种混合PRP作为实验组移植。所有实验区用可吸收胶原膜覆盖，然后用4.0黑色手术线封闭伤口。术后每天肌注50000IU/Kg青霉素G，连续3日。

　　组织制备：12只家兔分为6组，每组1, 2, 3，4, 5和6周愈合期。在每个指定的愈合期结束时，用过量的氯化钾溶液处死两只兔子。整块切除胫骨植入物和周围骨组织和10%中性缓冲福尔马林浸泡立即固定。通过一系列乙醇脱水，然后嵌入甲基丙烯酸基树脂。整个脱水和渗透过程通常需要2个星期。切片并进行HE染色。

　　组织形态测量：传统的光学显微镜检查后，骨形态计量学测量使用一个自动化的两图像分析软件Image-Pro Plus。以12.5×放大整个组织标本的照片后，通过50×和100×倍率测量各部分所需的测量，各种图像不重叠。种植体的骨接触，以及骨愈合，定义为直接接触骨面直线长度与种植体植入周长除以从*冠表面处理的位置到沿种植体表面2.1 - 2.7 mm距离。

　　结果：组织学表现：光镜检查切片显示如下：2周。在对照组中，组织切片显示骨移植材料已经开始吸收，2/3的骨间隙从骨缺损边缘向种植体表面形成新骨。然而，在实验组，1／3的骨间隙只观察到新骨形成。在4周对照组，骨移植材料仍存在。在种植体表面新形成的骨密度低。在实验组中，骨缺损边缘的1/2的骨小梁出现在种植体表面，部分地包围了骨移植材料，观察到有少量的吸收。6周对照组新生骨完全填充骨间隙与种植体表面完全接触。在骨小梁出现少量残留的骨移植材料。在实验组中，2／3的骨间隙完全由新形成的骨填充。骨移植材料要比第四周明显减少。各组兔的缺损区表现出不同程度的新生骨形成，但实验组动物的骨缺损含有*少数量的新生骨。与实验组相比，对照组假体周围有较多新生骨和较好的骨愈合过程。

　　组织形态学分析：定量形态分析显示，对照组骨接触明显增多。对照组种植体的骨接触率显著高于实验组。

　　结论：本研究报告了PRP对牛源性种植体周围缺损的修复作用。兔胫骨创建骨缺损。牙种植体同单独的异种移植体或PRP和异种移植体混合物被植入到缺陷处。单独的异种移植体骨植入物接触的平均百分比为25.23±15.15%，而PRP和异种移植体混合物骨植入物接触的平均百分比仅为8.16±6.26%。根据这些发现，在牙种植体周围植入添加PRP的牛源性异种骨，以延缓种植体周围骨的愈合。到目前为止，关于PRP的疗效和效率的科学证据仍有争议。