大鼠胎盘转移,乳腺排泄 中国实验动物信息网 2020-11-17 561

　　背景：高血压是妊娠期*常见的医疗问题之一，影响6～8%的孕妇。尽管许多高血压孕妇有健康的婴儿，没有严重的问题，但高血压可能增加母亲和围产期风险。例如，母亲患上先兆子痫，这可能会影响胎盘以及母亲的肾脏、肝脏和大脑，并导致胎儿并发症，如低体重和早产。在*严重的情况下，先兆子痫可进展为抽搐和危及生命。然而，孕妇用药物治疗可能会引起各种发育毒性。一些降低血压的药物在怀孕期间被认为是安全的。然而，一些*有效的抗高血压药物，如血管紧张素转换酶（ACE）抑制剂和血管紧张素受体阻滞剂（ARBs）通常避免在怀孕期间使用。例如，氯沙坦已被FDA指定为妊娠D类，这意味着根据不良反应数据，有确凿的证据证明其对人类胎儿的发育有影响。与ACE抑制剂和ARBs相关的胎儿毒性同血管紧张素Ⅱ的降低与胎儿发育过程中肾素-血管紧张素系统的功能失调有关。ACE抑制剂可引起胎儿毒性包括严重的肾功能不全、新生儿无尿，颅骨骨化缺陷，胎儿生长迟缓，死胎，畸形特征。宫内暴露于药胎儿或新生儿毒性的证据，肾功能不全与ARB的使用物已经显示降低胎儿体重，引起肾功能损害，甚至导致胎儿死亡。除了药物本身的毒性作用外，药物的分布特征直接关系到胎儿和新生儿的安全。药物在胎儿和母乳中的大量分布是导致胎儿和新生儿毒性的重要因素之一，而较少的分布会导致毒性降低。胎盘转移和乳汁的排泄是ARBs的特征。FMS在胎儿或母乳中的分布尚不清楚，是评价其在妊娠和哺乳中安全性的关键。本研究对妊娠和哺乳期大鼠的胎盘转移和乳汁分泌进行了检测。静脉输液后，对胎盘、羊水、胎儿和乳汁中FMS的药动学进行了评价。

　　方法：动物试验：雌性SD大鼠（8-10周龄，体重250-330 g），12小时的光/暗周期动物设施，温度23±3°C，相对湿度55±15%，每小时换气10-20次。每笼饲养3只动物。

　　FMS的母婴转移：妊娠16-17天（GD）时，胎儿的大小足够用于分析，舒泰50（20毫克/公斤）腹腔注射麻醉雌性大鼠，将聚乙烯管材植入颈内静脉和股动脉。恢复1天后，FMS溶于生理盐水经颈静脉注射，剂量为2.70和5.50毫克/公斤，速率分别为0.17和0.34毫克/小时/公斤，达到目标浓度100和200纳克/毫升。初始静脉推注负荷剂量和持续静脉输注速率分别通过目标稳态浓度（CSS）乘以稳态分布体积和FMS清除率确定。无麻醉条件下给药。术前、术后4, 8, 24小时、28小时、32小时从股动脉取血。在每个采样时间，收集约0.3毫升的血液与同体积肝素化生理盐水（50 IU /毫升）混合。13000 g离心5 min，并存储在-20°C直到血浆样品分析。开始静脉输注药品后32h，舒泰静脉注射（2 mg/kg）麻醉动物后，颈椎脱臼法处死动物，每一个组织三个样品，如胎盘、羊水、和胎儿。胎盘和胎儿加入生理盐水后用均质机均质。样品存放在?20°C直到分析。24-32hde FMS的平均浓度表示稳态血浆浓度. 通过稳态等离子体FMS浓度除以32小时的平均组织FMS浓度计算组织-血浆分配系数（KP）。

　　乳汁分泌中的FMS：在泌乳中期期间，哺乳期的第12-13天（LD），雌性大鼠腹腔注射舒泰50（20 mg/kg）麻醉状态下，颈内静脉与股动脉植入聚乙烯管。恢复1天后，FMS溶于生理盐水经颈静脉注射，剂量为2.70和5.50毫克/公斤，速率分别为0.17和0.34毫克/小时/公斤，达到目标浓度100和200纳克/毫升。在非禁食状态下给予剂量。在给药前和4, 8, 24、28、32小时后收集血样。在持续静脉输注32小时后，舒泰50, 2 mg/kg，静脉注射轻度麻醉状态下取乳汁。在乳汁取样前30分钟皮下注射催产素5 IU，以便于乳汁的收集。用手轻轻拔出乳头刺激乳汁排出，并在聚丙烯管内收集乳汁。样品存放在?20°C直到分析。24-32hde FMS的平均浓度表示稳态血浆浓度. 乳汁的KP计算为32小时乳汁中浓度超过血浆FMS浓度。

　　液相色谱-质谱联用测定FMS的浓度：通过先前报道的LC-MS/MS法来测定生物样品中FMS的浓度。200μL乙腈和50μL的内标溶液被添加到50μl解冻的生物样品，漩涡混合1分钟。混合样品在4°C，15000G离心10 min. 将上清液转移到聚丙烯管中，用相同体积的蒸馏水稀释。在LC-MS/MS中注入10uL体积液体。

　　结果：液相色谱-质谱联用测定FMS：血浆、胎盘、羊水、胎儿和乳基质中检测的下限为0.5纳克/毫升。血浆中的准确率为94.2 - 117.9%，胎盘中的89.2 - 111%，羊水中的87.7 - 116.9%，胎儿的89 - 110.7%，乳汁中的88.8 - 109.5%。血浆、胎盘、羊水、胎儿、乳样精度分别为8、12.3、3.8、10.4和8.5%。

　　FMS的胎盘转移：对妊娠期大鼠血浆中FMS稳态浓度（CSS）为100和200 ng／ml时，平均血浆和组织FMS浓度随时间变化。CSS 的预测区间为10和90%，主要是FMS被清除。10和90%的CSS预测区间分别为81.4和138.6纳克/毫升，目标为100毫微克/毫升（静脉滴注，速度=0.17毫克/小时/公斤）及162.8和277.3纳克/毫升，目标为200毫微克/毫升（静脉滴注，速度=0.34毫克/小时/公斤）。给药FMS后，血浆FMS浓度迅速增加，达到114.1±22.0和213±89.4毫微克/毫升，分别在24小时接近预期目标CSS= 100和200纳克/毫升。FMS浓度在24, 28小时和32小时后没有显著差异，表明FMS浓度已经达到稳定状态。在给药32小时后胎盘、羊水和胎儿及血浆中的FMS浓度。CSS=200毫微克/毫升的目标剂量组显示胎盘FMS的浓度为112.2±51.2 ng/g而CSS=100 ng/ml组7胎盘FMS的浓度为4.9±24.5ng/g。CSS=200毫微克/毫升和CSS=100毫微克/毫升剂量组羊水FMS质量浓度分别为3.3±3、和2.3±1.3毫微克/毫升，胎儿FMS质量浓度分别为37.4±23.6 vs. 19.2±4.8纳克/克。CSS= 200毫微克/毫升和CSS=100 ng/ml组之间组织中的浓度差异无统计学意义。表2总结了平均组织对血浆分配系数（KP）。胎盘与血浆的分配系数（KP，胎盘）为44.6 - 59%，羊水和胎儿的KP值低，分别为1.3 - 1.7%和14.9 - 17%。高剂量组和低剂量组所有组织的KP值是可比的，说明随着血浆浓度的增加，受试组织中的浓度成比例增加，而FMS的胎盘转移不受剂量的影响。

　　乳汁分泌中的FMS：100和200毫微克/毫升的目标稳态浓度（CSS）在分娩后13 - 14天，伴随FMS的使用，血浆和乳汁中平均FMS浓度随时间而变化。Css预测区间为10-90%，血浆FMS浓度迅速增加，接近目标CSS的100和200纳克/毫升，并保持整个研究期间。各采样时间血浆中FMS浓度差异无统计学意义。给药后32小时，在100和200 ng/ml组血浆浓度分别为126.4±49.3和198.8±40.8毫微克/毫升。血浆和乳汁中FMS浓度显著增加，呈剂量依赖性。CSS=200 ng/ml组比CSS= 100 ng/ml组有显著较高的血浆和乳汁FMS浓度。计算出的血浆与血浆分配系数（KP）为10.4～15.2%。牛奶与血浆分配系数在剂量组之间比较（100对200毫微克/毫升）表明随着血浆浓度的增加，乳汁中浓度成比例增加，而乳汁分泌量没有受到剂量的影响。

　　结论：这是*次关于胎儿和新生儿暴露于FMS的报告。我们的数据表明，FMS转移到胎儿和母乳比其他ARBs相对较低。需要进一步的研究来评估FMS转移到胎儿和母乳的临床影响，揭示FMS在胎儿或母乳中的潜在作用机制。