间充质干细胞 中国实验动物信息网 2020-11-02 462

　　胞外囊泡(EV)是由正常和疾病细胞释放的纳米大小的囊泡，作为一种新的细胞间通讯形式，可以作为基因和药物的有效治疗载体。然而，EV的体内特性，如组织分布、血液水平和尿液清除率，这些将决定其治疗效果和潜在毒性的重要参数仍有许多未知之处。

　　MSC-EV在体内的分布与代谢

　　间充质干细胞(MSC)分泌大量的EV(MSC-EV)，MSC-EV内容物包括各种蛋白和RNA等。在MSC-EV中，大多数RNA(>80%)；另外还有一些小RNA，其中miRNA约为44%、tRNA约为47%[1]。目前，非常少的研究专注于MSC-EV在体内的分布和代谢。

　　MSC-EV的体内分布非常类似MSC，即静脉注射MSC-EV后，在肝脏和脾脏的分布*多，然后分散到其他的组织器官。有意思的是，MSC有明显的肺部滞留，但MSC-EV的肺部滞留不明显。在肺中几乎检测不到静脉输入的MSC-EV，而输注人肺成纤维细胞来源的EV则容易在肺部积聚。

　　在小鼠体内的生物发光和荧光介导的断层成像显示，静脉注射MSC-EV的主要部位是肝、肾和脾。

　　在注射后30分钟内在脑、心脏和肌肉中检测到EV，在60分钟后尿液中检测到EV；但是6小时后，体内基本很难检测到输入的EV。

　　在急性肾损伤的小鼠模型实验中，MSC-EV静脉输入24小时后，除了在肝脾中积累，还可以观察到在急性肾损伤小鼠的肾脏中积累，而在对照组肾脏没有观察到MSC-EV的积累。

　　也有研究显示MSC-EV在体内可检测到的时间不止是6小时，即使静脉注射48小时后，在肝脏和脾脏的分布信号强度依然很强。

　　DID标记的MSC-EV静脉输入体内后，在肝脏和脾脏中分布*多，在脊柱、股骨和胫骨的骨髓中分布较少，在肺、心脏和肾脏中检测不到；如果对骨髓进行放射损伤，则MSC-EV注射后1小时后即可检测到损伤骨髓部位有MSC-EV聚集，聚集到骨髓的MSC-EV在24小时内没有明显的减少[2]。MSC-EV的这个特性和MSC非常相似，能主动趋化到损伤部位聚集。

　　研究员使用PKH26或CFSE标记EV进行体内示踪，EV使用流式细胞仪进行鉴定和计数，并使用Nanosight纳米颗粒跟踪分析来测量尺寸和形态，结果发现，静脉注射的MSC-EV能迁移到了梗死的大脑，而且MSC-EV通过血脑屏障的效率超过MSC本身。

　　有意思的是，MSC-EV也是可以像MSC一样能被修饰改造。比如，经尾静脉注射阿尔茨海默病小鼠体内，狂犬病病毒糖蛋白(RVG)修饰的MSC-EV迁移到大脑的数量，至少是没有经过修饰的MSC-EV的两倍。

　　有一篇研究文章提到不同细胞类型对MSC-EV的摄取，即CD11b阳性和F4/80阳性细胞(单核细胞/中性粒细胞/巨噬细胞)摄取MSC-EV明显增加，而B220细胞(B淋巴细胞)摄取MSC-EV不明显。