动物模型,白色念珠菌 中国实验动物信息网 2020-07-25 1033

　　（1）复制方法将白色念珠菌接种到sabo培养基中，在28°C下培养3天，用1 ml生理盐水洗涤，转移到研磨机中并稀释，对红细胞计数器计数，接种浓度为10000000 CFU /是毫升。 ..经由耳静脉通过空气栓塞处死体重为1.5-2.5kg的成年兔子，并在无菌条件下移开眼睛以产生具有2mm巩膜环的角膜植入物。放入无菌甘油中并冷冻以备后用。实验前三天，每天四次将0.5％的氯霉素滴眼液涂在滴眼液上。在实验之前，将动物用盐酸氯胺酮（50 mg/kg体重），盐酸氯丙嗪（10 mg/kg体重）和硫酸阿托品（0.015 mg/kg体重）的混合物麻醉。眼内注射后，将角膜用2 ml 2％的利多卡因麻醉。在无菌条件下，将角膜植入物在室温下于生理盐水中浸泡10分钟，然后在No.用手术刀轻轻刮除受体的角膜上皮，并用10-0尼龙线将供体的角膜移植物径向缝合到受体的角膜上。然后使用注射器将0.1 ml细菌溶液注入到植入物和植入床之间的角膜中央。 20,000 U结膜下注射庆大霉素，并将红霉素软膏涂在眼睛上。手术后，每天滴注0.5％的氯霉素滴眼液4次，术后48小时摘除角膜移植物。接种后第二天可以看到典型的角膜真菌损伤。

　　（2）模型特征：角膜表面晶状体技术可用于在角膜植入物和植入物床之间接种真菌，以建立兔角膜炎模型，而无需使用皮质类固醇。角膜植入物用缝合线固定，各层之间的空间稳定，从而使真菌与伤口的角膜表面完美接触，从而为真菌的存活和繁殖创造了良好的环境。结果，所需的真菌细菌数量相对较低，成功的感染率很高，再现性好，角膜移植物容易获得，并且不会发生交叉感染，但是这种方法的操作过程是它相对复杂，并且对实验者的手术技能有一定要求。接种后第二天可以看到典型的角膜真菌损伤。白色念珠菌菌丝在角膜平板上垂直生长，并散布着圆形孢子。接种8天后，菌丝长入角膜的深层间隙层。真菌性角膜炎的发生与病原体，真菌的致病性，免疫状态和真菌的数量有关。角膜方法不仅建立由白色念珠菌引起的角膜炎，而且建立各种菌株如烟曲霉，茄形镰刀菌，产黄青霉菌的角膜炎模型。病变程度不同，但感染成功率不同。高且易于重复。 （3）比较医学真菌性角膜炎（FK）是一种具有高度失明率的感染性角膜病，严重时会失去眼睛。国外的研究报告已经成功地使用近交NIHSwiss小鼠和近交BALB/c小鼠建立了真菌性角膜炎的动物模型。但是，由于小鼠角膜的尺寸很小，手术很困难，感染后可获得的样本很少，并且对于观察常见的真菌感染形式没有用。当前，在大多数真菌眼感染研究中，兔子是*常用的模型动物。由于兔角膜比人角膜大，因此手术和局部观察容易，并且可以获得更多的实验样本。迄今为止，已发现超过70种真菌引起角膜感染，主要病原体因地区而异，白色念珠菌，镰刀菌和曲霉是主要病原体。准备用于角膜真菌感染的动物模型的传统方法是角膜基质注射。通过注射器将预制的真菌液注入动物角膜的中央基质层。但是，在真菌性角膜炎的临床病例中，这种动物模型不同于表面感染的自然过程。相同。一些研究人员在接种真菌之前先在动物中结膜下注射皮质类固醇，以增加感染率并维持持续感染。该模型主要用于研究真菌性角膜炎的疗效和诊断方法。自上世纪末以来，国外学者发明了隐形眼镜方法。完全刮除兔角膜的中央上皮，然后用柔软的隐形眼镜覆盖。然后将白色念珠菌注射在隐形眼镜和角膜层之间。此方法类似。人角膜感染的过程可以应用于念珠菌性角膜炎的组织病理学研究。该模型使用角膜表面晶状体技术复制了兔角膜炎模型。与其他复制模型相比，该模型近似于临床真菌性角膜炎的自然病程。