动物造模,背根节切断模型 中国实验动物信息网 2022-02-03 1186

　　源模型源的*部分和原理介绍

　　部分反向引入模型（也称为部分背根去除模型）分为两种类型。一种是切割背根并保留背根部分，另一种是去除背根部分。 1958年，Liu和Chambers使用了猫的部分背根切开模型（一侧切除了T10？L6、S1？Ca7背根，保留了L7背根作为后备根）观察到切除（T10→L6、S1→Ca7）。动物存活几个月后，切去剩余的背根和相对侧的相应背根，比较两个背根的溃疡区域，并将神经纤维（源自备用背根）分布在脊髓中。我被允许。背根的范围和密度比对侧的范围和密度大得多。这是因为在切开相邻的背根后，由于保留，在保留的背根（L7）的中心边缘有一个侧芽，在向头部突出的过程中，脊髓的尾端被切开压碎了。它被显示为弥补接近。 CNS末端的变化是脊髓损伤后侧向可塑性的*证据，或受损脊髓的“可塑性”。

　　侧芽与神经再生不同，但是侧芽现象可能是促进神经再生的重要因素。因此，探索脊柱可塑性机制对理解中枢神经再生机制具有重要价值。在随后的几十年中，大多数学者进一步利用溃疡性银染，超微结构定量和辣根过氧化物酶（HRP）追踪技术证实了大鼠和猫的脊髓是可塑性的做到了在中国，吴良芳在电子显微镜下观察了1990年代部分背根横切后猫脊髓第二层突触重塑的可塑性。由于老鼠的高生存能力和繁殖力，它们经常被用来创建动物模型。该实验以创建大鼠背根神经节模型为例。去除左L1-L4背根神经节和L6背根神经节，同时保留左L5背根神经节。

　　第2节模型创建 一。实验目的

　　观察大鼠脊髓的可塑性。

　　2.实验原理

　　在切断部分背根之后，备用背根的中心位于脊髓的头和尾上，以补充由于相邻背根的切开而导致断裂的背根的中心。形成侧芽。神经末梢，即受伤后的这种侧芽，称为脊柱可塑性。

　　3.实验材料和方法

　　（1）实验材料

　　1.试剂和无菌盐水，碘伏，青霉素的制备。使用无菌盐水制备3.6％的水合氯醛（尽快制备，使水合氯醛溶于水后更容易溶解）。

　　2.实验室耗材：5 ml一次性无菌注射器，1 ml一次性无菌注射器，无菌棉球，一次性无菌悬垂性布，3-0无菌手术缝合线。

　　3.设备及设备：动物体温维持设备，紫外线消毒灯，剃须刀，电加热恒温干燥箱。

　　4.手术器械包括骨钳，带齿镊子，无牙镊子，神经钩，肘形眼剪刀，微型剪刀，显微镜镊子，手术剪刀，自制手术钩（1毫升注射器头）弯曲）以直角折叠。

　　5.实验动物：成年SD大鼠，雌性，体重280-300g。

　　（2）实验的具体方法和操作步骤

　　1.手术前，在高压灭菌器中准备好手术器械和棉球，然后放入烤箱中干燥。手术前1小时，用紫外线照射手术室。

　　2.操作过程

　　1）麻醉：抓住大鼠并腹膜内注射3 ml 3.6％水合氯醛，然后放回小鼠笼中。 （1）选择带有细针的注射器以减少创伤通常，通常使用规格为5 ml的无菌一次性注射器。

　　（2）注射部位通常位于左下腹部或右下腹部，以免损坏膀胱，胰腺，肾脏和其他重要器官。 （3）插入腹腔的针头长度为1/3至1/2、

　　（4）将针头插入腹腔后，确保没有抽血，以防止药物直接进入血管。

　　（5）请勿在大腿肌肉中注入液体。如果不注射液体，药物的吸收将非常缓慢。如果误注射，可以选择另一只大鼠进行麻醉。实验第二天可以使用注射错误的大鼠。今天不宜再次麻醉。重复麻醉会增加动物死亡率。

　　2）术前水化：麻醉动物后，将5 ml无菌盐水注入腹腔。

　　3）固定，皮肤准备，消毒：使用橡皮筋将大鼠肢体固定在解剖板上的腹部位置。轻轻地将大鼠的舌头向一侧拉，以保持呼吸尽可能平稳。打开恒温器，将温度设置为37°C，将手术室空调器设置为28°C。使用剃须刀去除臀部和sa尾骨上的毛发。

　　碘伏对剃须区域进行消毒，如图19-1所示。

　　4）手术程序（注意：以下程序需要在遇到出血点时立即用棉球压缩出血）。

　　（1）在脊柱腰lum部切开10厘米。

　　（2）解剖位置：大鼠髋关节对应于L6椎体。使用眼科剪刀，闭合棘突L1至L6的左侧，并切断与之相连的筋膜。

　　（3）如图19-3所示，用微型剪刀将L1、L2、L3、L4和L6的横向过程暴露在左侧，并用神经钩擦拭椎弓根的其余肌肉。

　　（4）使用较长的尖骨依次咬合L1、L2、L3、L4和L6的横突至背根神经节和中央分支以及一小段脊神经（大约1毫米）完全暴露（背根的脊神经）与先前的路径混合）。不要将骨窗打开得太宽。增加它会增加创伤。

　　工作点：左侧的上下椎体形成的横向过程可以用两个“ C”样式表示。

　　活体的四个部分a，b，c，d彼此相邻。用锋利的鼻子完全切掉两个部分b和d后，您可以沿着后牙根部分的颅侧看到后牙根部分。背根段的中央和周围分支（约1毫米长）在尾部暴露。用

　　（5）钩轻轻地将分支拉到背根神经节周围。此时，背根神经节和脊髓之间存在间隙。缝隙覆盖有半透明硬脑膜。使用1毫升注射器的针尖轻轻刮擦覆盖间隙的硬脑膜，以显示脑脊液明显流出。

　　注意：请勿过度拉钩。建议检查背根神经节和脊髓之间的间隙。否则，连接到脊髓的前根和后根会被撕掉。残端通常位于椎管内，仅在解剖大鼠时才能看到。

　　（6）用微型剪刀轻轻切开背根的中央分支，同时保持钩子固定。断开连接时要特别小心。前根不能切开。背根的中央分支与前根之间的间隙非常狭窄。必须在此间隙中插入显微镜剪刀以切断背根。中央分公司。用微镊子轻轻提起背根神经节，并用微型剪刀剪开背根神经节的另一端。此时，脊神经实际上是前根，因此请注意不要直接切开前根。当与背根融合时，会形成混合了运动和感觉的混合神经，一旦它离开孔眼，脊神经就会分裂成腹侧和背侧分支。去除背根，清楚地看到前根。

　　（7）按照上述步骤依次切割左L1、L2、L3、L4和L6背根节，剩下左L5背根节。 （8）通常，当首次暴露L6横突时，大鼠的麻醉深度不足以维持手术，可以腹膜内注射1 ml的3.6％水合氯醛。

　　（9）逐层缝合肌肉和皮肤。 （10）再次用碘消毒伤口，并在手术后1周内每天两次腹膜内注射200,000 U青霉素。

　　（11）放回松鼠的篮子里，放新的床上用品。给大鼠喂食和饮水后，每天观察其状况。

　　操作要点：确保将其放在加热器旁边以保持体温。但是，必须保持一定距离，以使体温不会变得太高。您可以把手放在老鼠上，看看温度是否正确。

　　（12）清洁手术设备和手术室。

　　IV。动物的术后状态动物麻醉后醒来，可以观察到右后肢完全正常，左后肢柔软。如果后肢瘫痪，可能是由于脊柱休克（通常在1周后可恢复）或由于手术过程中对脊髓的过度创伤而导致的截瘫。这种情况下的老鼠需要移开）。

　　5.神经功能的评估

　　内容包括坐骨神经传导速度的测量，鞋底的热刺激，鞋底的机械刺激。

　　6.经验和经验

　　此模型具有创伤，出血和手术时间长的特点。创建模型大约需要3个小时。应该使用结实的老鼠，体重超过280g。在此过程中，您将需要小心止血，并制作一个小棉球以止血。分开神经根时，请注意保持动物的体温，并保持温和。手术后应始终将其存放在温室中。

　　尝试选择一种单侧传入模型，该模型将减少创伤，提高生存率并帮助术后恢复后肢功能。经常被忽视的事情之一是脊柱完整性。要去除背根节段，必须在手术过程中去除横突。横向过程是连接上下椎体的链接之一、从而损害了脊柱的完整性。这是破坏。后肢运动不仅需要神经系统的支持，还需要骨骼系统的支持。当选择双侧背根消融模型时，骨骼系统被完全破坏，单侧背根消融模型也可以在非手术方面起到补偿作用。

　　优于雌性大鼠，因为手术后可能会有一段时间的尿retention留。雌性尿道比雄性尿道短，因此更容易挤压尿液。如果在手术前使用抗生素预防感染，则青霉素是首选，而第三代头孢菌素则被禁止，因为它们会影响血液凝结并导致术中出血。我会。作者曾经使用头孢噻肟钠进行术前预防，由于在手术中途几乎流血，导致动物死亡。找到相关信息进一步证实了第三代头孢菌素会影响凝血系统。青霉素粉末溶解在液体中后应立即开始崩解，因此青霉素溶液应准备立即使用。

　　手术前补水非常重要。这将减少失血并提供一些血容量替代。补充血液量，保持体温，确保呼吸通畅并保持足够的麻醉深度是任何动物手术成功的基石。